[发明专利]一种快速鉴定啤酒酵母单倍体的方法无效
| 申请号： | 201210189030.2 | 申请日： | 2012-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN102732620A | 公开（公告）日： | 2012-10-17 |
| 发明（设计）人： | 李崎;许维娜;王金晶;李永仙;刘春凤;郑飞云 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏省无*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 鉴定 啤酒 酵母 单倍体 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种快速鉴定啤酒酵母单倍体的方法，其特征在于首先采用菌落PCR进行初步判定，然后通过流式细胞仪检测DNA含量确定倍性。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于所述菌落PCR程序为：95℃变性5min；94℃变性1-2min，50℃退火30-60s，72℃延伸1-2min，25-40个循环；72℃总延伸5min。
3.权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述流式细胞仪检测方法前处理步骤如下：
菌株与单倍体标准菌W303-1A、W303-1B分别接种于YEPD液体培养基，28℃振荡培养12-24h；取0.5-1mL菌液到1.5mL离心管中，8,000×g-12,000×g离心5-10min收集菌体，菌体重悬于PBS缓冲液后离心、洗涤2-3次，然后用PBS溶解；将菌液沸水浴2-8min杀死细胞；加入10-12μL 10mg/mL的RNaseA，50℃水浴30-50min，然后加入20-24μL 20mg/mL proteinase K，50℃水浴30-50min；离心后收集菌体，重悬于PBS后适当稀释，超声10-20s，间隔2-3s，重复2-3次；上机前每mL样品加入5-10μL 1mg/mL的碘化丙锭(PI)，避光反应5-10min。
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