[发明专利]氨苯砜半抗原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及氨苯砜半抗原及其制备方法和应用。

技术背景

氨苯砜（dapsone，DDS）属砜类化合物，N-乙酰氨苯砜（mono-N-acetyl dapsone，MADDS）是氨苯砜的主要代谢产物。氨苯砜对麻风杆菌有较强的抑菌作用，是治疗各类麻风病的首选药，大剂量使用时显示杀菌作用。由于其与磺胺类药物具有协同增效作用，在动物和水产养殖中曾作为磺胺增效剂使用。然而氨苯砜毒性较大，易发生溶血性贫血与发绀，并可出现高铁血红蛋白血症、肝肾功能损害和精神障碍，我国农业部235号公告明确规定禁止以任何用途将氨苯砜用于食品动物，在动物性食品中不得检出；欧盟2377/90也明确规定氨苯砜为禁用药物。

目前国内外关于氨苯砜药物残留的检测报道较少，多与磺胺类药物同时检测，方法包括高效液相色谱法和液质联用法，这些方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用；与之相比，酶联免疫方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国畜禽养殖户、屠宰场、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种氨苯砜半抗原及其制备方法。

本发明提供的氨苯砜半抗原，分子结构式为：

。

本发明提供的氨苯砜半抗原的制备方法，包括如下步骤：

0.50g氨苯砜、0.40g琥珀酸酐和2ml吡啶在10ml二甲基亚砜中混合，在60℃下搅拌反应10h，蒸除溶剂，柱层析后在乙醇-水体系中重结晶得到氨苯砜单琥珀酸酰胺，即为氨苯砜半抗原。

本发明的另一个目的是上述氨苯砜半抗原在免疫检测中的应用，具体包括由所述氨苯砜半抗原与载体蛋白偶联得到的氨苯砜抗原，及由所得氨苯砜抗原免疫动物制备得到的氨苯砜抗体。

其中所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。

所述抗体为氨苯砜单克隆抗体，是由氨苯砜单克隆抗体杂交瘤细胞株D-3-4 CGMCC No.6066分泌获得。

本发明还提供由上述氨苯砜抗体制备的酶联免疫试剂盒，及其在检测动物源性食品中氨苯砜残留的应用。

本发明提供的氨苯砜半抗原既最大程度地保留了氨苯砜母核的化学结构，又通过化学合成改造引入了可以与蛋白质偶联的—COOH，合成方法简单，纯度、产率较高；用该半抗原作为原料，制备适于动物免疫的抗原体系免疫动物，所得抗体的效价、特异性、亲和力都比较好；所得的抗体用于酶联免疫试剂盒，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适于动物源性食品中氨苯砜残留的现场监控和大量样本的筛查。本发明的氨苯砜半抗原在氨苯砜的检测中发挥重要作用。

附图说明

图1：氨苯砜半抗原合成路线图

图2：氨苯砜半抗原核磁共振氢谱图

图3：氨苯砜酶联免疫试剂盒标准曲线

具体实施方式

下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。

实施例1氨苯砜半抗原的合成和鉴定

一、氨苯砜半抗原的合成（合成路线如图1）

0.50g氨苯砜、0.40g琥珀酸酐和2ml吡啶在10ml二甲基亚砜中混合，在60℃下搅拌反应10h，蒸除溶剂，柱层析后在乙醇-水体系中重结晶得到氨苯砜单琥珀酸酰胺，即为氨苯砜半抗原。

二、氨苯砜半抗原的鉴定

取合成的氨苯砜半抗原经核磁共振氢谱测定，如图2所示，图谱中12.0ppm左右的羧基信号峰以及2~3ppm之间的烷烃信号峰，说明半抗原合成成功。

实施例2氨苯砜抗原

将氨苯砜半抗原与载体蛋白进行偶联得到氨苯砜抗原。

一、免疫原的制备——氨苯砜半抗原-牛血清白蛋白偶联物合成

取氨苯砜半抗原12mg用1.5ml N,N-二甲基甲酰胺溶解，得到溶液I；取50%的戊二醛10μl加入溶液I中，室温下搅拌反应18h，得到溶液Ⅱ；取牛血清白蛋白60mg用4.5ml水稀释后加入溶液Ⅱ中，反应过夜后加入24mg NaBH₄反应3h，用三蒸水透析48h，即得氨苯砜免疫原。