[发明专利]八氯苯乙烯半抗原、人工抗原和特异性抗体

说明书

技术领域

本发明属于持久性有机污染物免疫化学和残留分析技术领域，涉及八氯苯乙烯的半抗原、人工抗原及抗体和针对八氯苯乙烯的检测。 

背景技术

八氯苯乙烯[1，2，3，4，5-pentachloro-6-(1，2，2-trichlorovinyl)benzene，别名Octachlorostyrene，简称OCS]是一种具有独特结构的多卤芳香族化合物，属于具有持久性和生物累积性的有毒物质(Persistent Bioaccumulative and Toxic，PBT)中最具有危险类物质之一。八氯苯乙烯并非是人类刻意生产出来的产品，而是以人们工业生产中副产物的形式出现；通常形成于碳氢化合物高温卤化条件下，此外，也在铝/镁制品、氯碱工业、含氯溶剂的生产以及废弃物焚烧等过程中产生。由于它容易在鱼虾，港湾鼠海豚，蓝山雀以及人体脂肪组织和肝脏积累，并能通过环境介质(水，大气或生物等)迁移严重危害人类健康和环境，因而备受世界各国关注。 

八氯苯乙烯的结构式为： 

OCS的生物富集因子高达8100～1400000，表明其有很强的生物积累性。又由于其水溶性低，OCS能快速从水中分离并吸附到沉淀物和水体颗粒物中，故OCS对水生生物危害犹大。在含有OCS的工业污水以及废气排放区域，鱼体内组织能检测到高含量的OCS浓度； 对长期服食含OCS的水生物的兔子进行抽血分析得知，兔子体内被检测出高含量的OCS，这表明OCS含量可随着食物链的增长呈现生物放大的特点，表现出明显的OCS生物积累性(Ofstad等，Sci.Total.Environ.，10：219-230，1978；Dethlefsen等，Arch.Fish.Mar.Res.，43(3)：215-242，1996)。此外，动物实验还表明OCS对动物的肝脏、甲状腺、肾脏和血液循环系统都有负面影响。OCS还对鱼类的新陈代谢和水中藻类的光合作用具有干扰和抑制作用。 

通过对细胞做OCS磷酸盐溶液培育试验，Park等(Toxicol.In Vitro，22：367-375，2008)发现随着OCS浓度的增加以及时间的延长，细胞内的活性氧基团会增加，同时细胞溶质内的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)被诱导活跃，导致谷胱甘肽浓度的降低和染色体的破碎以及凝聚，最终引发细胞的程序性死亡。Choi等(Environ.Toxicol.Chem.，27：1118-1127，2008；Environ.Toxicology Phar.，28：269-274，2009)对摇蚊及其幼虫也做了OCS溶液培育试验，结果表明随着OCS浓度增加，摇蚊的雌雄性别比有明显改变，从而导致摇蚊群的蚊虫数目降低，同时热休克蛋白和血红素基因的表达也得到增强。 

OCS不仅对环境周边生物造成了影响，而且对人类自身安全也有很多潜在的威胁。OCS进入人体的途径主要包括摄入食物(尤其是含OCS的鱼类)、呼吸道吸入以及皮肤接触。1992年通过对497名加拿大妇女母乳样品进行随机抽样调查，发现有7％的妇女的乳汁中能检测到OCS，其OCS平均含量为0.05ng/g母乳(或表示为2.16ng/g母乳蛋白)(Newsome等，Chemosphere，30：2143-2153，1995)；又通过对长期处在含有OCS场所工作的工人进行抽血检测发现，这些工人的血液中OCS含量明显超标(Selden等，Occup.Environ.Med.，54(8)：613-8，1997)。 

基于此，开展相应的OCS分析检测具有非常重要的现实意义。而目前对OCS的检测大多依赖气相色谱法(GC)、液相色谱(HPLC)或者气相质谱连用(GC-MS)等常规手段。众所周知，HPLC或GC的使用通常会受到待测物的蒸气压、热稳定性以及发色团等理化性质的限制，不适用于难气化或难分离的有害物的分析。而且这些方法操作过于繁琐，同时需要对样品进行复杂的预处理。 

和其他的传统检测方法相比，酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，简称ELISA)是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的检测分析技术。该法具有特异性强、敏感性好、仪器化程度和分析成本低、样品前处理及操作简便、检测时间短、样品容量大等优点，不仅适合高极性和离子型物质的分析，而且便于实现现场的监控和大规模样本的快速筛选。 

发明内容