[发明专利]具有pH敏感特性的抗酸纳米口服DNA抗肿瘤疫苗及制备方法

权利要求书

1.具有pH敏感特性的抗酸纳米颗粒口服DNA抗肿瘤疫苗，其特征在于该疫苗是通过利用海藻酸对壳聚糖纳米颗粒进行修饰，使壳聚糖纳米颗粒具有pH敏感性，然后将编码肿瘤特异性抗原Legumain蛋白的DNA质粒装载到修饰后的壳聚糖纳米颗粒而制成；在疫苗通过胃液时保护DNA质粒不被降解，并在肠道中形成松散的结构，利于树突细胞及巨噬细胞吞噬，高效表达编码的基因；同时有效激发CD8⁺T细胞介导的免疫反应，降低调节T细胞对免疫系统的抑制作用，对肿瘤细胞进行杀伤，延缓肿瘤细胞的生长与转移。

2.如权利要求1所述的具有pH敏感特性的抗酸纳米颗粒口服DNA抗肿瘤疫苗的制备方法，其特征是具体步骤为：

第1、壳聚糖纳米颗粒的制备

第1.1、将分子量在28000至32000的长链壳聚糖溶解于双蒸水中，并调节pH值到5.2，在55℃下搅拌30分钟，形成A液；

第1.2、同时将25mM Na₂SO₄溶液与DNA质粒混合加热至55℃，匀速搅拌30分钟，形成B液；

第1.3、随后将A液与B液以体积比1∶1混合两种溶液，并马上进行混合，5分钟后将制备好的壳聚糖纳米颗粒保存在4℃；

第2、海藻酸侧链上的羧基的活化

将海藻酸粉末溶解到双蒸水中，并且将海藻酸溶液与加入的N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐按摩尔比1∶5∶5混合，并将pH值调节到9.0，室温搅拌过夜，活化后的海藻酸置于4℃保存待用；

第3、将第2步中活化的海藻酸与第1步中的壳聚糖纳米颗粒按1∶1的体积比混合，并调节pH值到6.0，室温20rpm，搅拌4～6小时，得到的产物放置4～7℃保存；

第4、将第3步中制备的纳米颗粒进行离心，12000rpm，10分钟，所得到的纳米颗粒将沉于离心管的底部，弃上清，并将纳米颗粒重悬于PBS缓冲液中，4～7℃保存，即得到具有pH敏感特性的抗酸纳米颗粒口服DNA抗肿瘤疫苗。