[发明专利]一种同时分析犬基因组DNA 17个基因座的荧光标记检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光标记复合扩增检测试剂盒，具体是涉及一种通过复合扩增同时分析犬基因组DNA16个STR基因座和DAmel基因座的五色荧光标记复合扩增检测试剂盒。 

  

背景技术

STR（short tandem repeat，短串联重复序列）是存在于真核生物基因组中的一类具有长度多态性的DNA序列，其核心序列由2～6个碱基构成，因该核心序列在不同个体间呈不同数目的串联重复而呈现出长度多态性，因而短串联重复序列遗传多态性在个体识别、亲权鉴定、法医鉴定、遗传育种及遗传连锁图谱构建等应用上起着非常重要的作用。 

STR基因座具有因片段小而容易扩增、各基因座的扩增条件相似而能够构建检测试剂盒的特点，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点，尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。长期的DNA检验实践表明，STR基因座的遗传多态性在品种间存在一定的差异，各个基因座间差别也很大。在犬类的个体识别、亲权鉴定和遗传育种等方面多采用美国ABI公司推荐的StockMarks Animal Genotyping System的10个犬基因座。 

在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术至少存在以下问题：美国ABI公司推荐的StockMarks Animal Genotyping System 中仅有10个犬基因座，而且有部分基因座遗传多态性不高，或是不同犬群间差异较大，由此给DNA检验技术的应用及其效率带来一定的影响，不能满足使用的要求。 

                                                                                                                                              

发明内容

发明目的

本发明的目的是提供一种犬17个基因座的荧光标记复合扩增检测试剂盒，提高了系统的累计个体识别力和累积非父排除率，满足犬的个体识别、亲权鉴定和遗传育种等方面应用的需要。

技术方案

一种同时分析犬基因组DNA 17个基因座的荧光标记检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有引物混合物如下：

上述17基因座对应的引物对中至少有一个引物的5’端进行荧光染料标记。

作为一种优化方式所述的17个基因座对应的引物分四组并分别用四种不同的荧光染料进行标记；其中PEZ1、PEZ2、FH2010、PEZ5和PEZ12为一组， DAmel、PEZ21、PEZ3、PEZ6和PEZ8为一组；FH2054、VWFX、FH2611和FH2132为一组；PEZ20、PEZ15和FH2079为一组； 

其中所述的四种荧光染料为FAM、HEX、TAMRA、ROX。

作为进一步优化方式：PEZ1、PEZ2、FH2010、PEZ5和PEZ12为一组，其对应的引物采用FAM标记；DAmel、PEZ21、PEZ3、PEZ6和PEZ8为一组，其对应的引物采用HEX标记；FH2054、VWFX、FH2611和FH2132为一组，其对应的引物采用TAMRA标记；PEZ20、PEZ15和FH2079为一组，其对应的引物采用ROX标记；