[发明专利]微环基因载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种微环基因载体，其特征在于，不含标准质粒中能关闭转基因表达的骨架DNA成分，所述微环基因载体包括：启动子、病毒基因组中负责基因表达和病毒复制的成分以及用于表达治疗性转基因产物的转基因或转基因表达盒子；所述微环基因载体可以在哺乳动物细胞内稳定的、高通量的表达所述治疗性转基因产物至少两个星期。

2.如权利要求1所述的微环基因载体，其特征在于，所述病毒基因组中负责基因表达和病毒复制的成分为乙肝病毒基因组中负责基因表达和病毒复制的成分。

3.如权利要求2所述的微环基因载体，其特征在于，所述乙肝病毒基因组中负责基因表达和病毒复制的成分包括：5’包装信号、3’包装信号、第一增强子以及病毒复制调节区域；

所述启动子、所述5’包装信号、所述转基因或转基因表达盒子、所述第一增强子、所述病毒复制调节区域以及所述3’包装信号依次连接。

4.如权利要求2所述的微环基因载体，其特征在于，所述乙肝病毒基因组中负责基因表达和病毒复制的成分包括：包装信号、第一增强子以及病毒复制调节区域；

所述包装信号、所述转基因或转基因表达盒子、所述第一增强子以及所述病毒复制调节区域依次连接，所述病毒复制调节区域和包装信号连接到一起，形成核心蛋白基因的启动子。

5.如权利要求2所述的微环基因载体，其特征在于，所述启动子为核心蛋白基因的启动子、第二型多聚酶基因启动子或第三型多聚酶基因启动子。

6.如权利要求1所述的微环基因载体，其特征在于，所述治疗性转基因产物为蛋白质或非编码RNA。

7.如权利要求6所述的微环基因载体，其特征在于，所述非编码RNA为小发夹RNA、微小RNA、反义RNA、诱饵RNA和核酶中的至少一种。

8.如权利要求1所述的微环基因载体，其特征在于，所述微环基因载体为双链DNA结构。

9.一种权利要求1～8中任一项所述的微环基因载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、提供具有重组酶ΦC31的细菌DNA附着点和重组酶ΦC31的噬菌体DNA附着点的标准质粒；

步骤二、将启动子、病毒基因组中负责基因表达和病毒复制的成分、用于表达治疗性转基因产物的转基因或转基因表达盒子三种DNA成分按照先后顺序依次插入到所述标准质粒的多克隆位点中，得到含有转基因或转基因表达盒子的载体；

步骤三、使用重组酶ΦC31处理所述含有转基因或转基因表达盒子的载体，重组得到所述微环基因载体。

10.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1～8中任一项所述的微环基因载体以及用于将所述微环基因载体送入靶细胞的工具。