[发明专利]乙型肝炎核酸疫苗及其构建方法

权利要求书

1.一种乙型肝炎核酸疫苗，以真核表达载体为基本骨架，其特征在于该疫苗含有乙肝病毒HBV包膜蛋白基因HBsAg、乙肝病毒核心抗原HBc与e抗原基因；还含有人的pre-miR181a序列，其中乙肝病毒HBV包膜蛋白基因HBsAg的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示、乙肝病毒核心抗原HBc与e抗原基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；人的pre-miR181a序列如SEQ ID NO：4所示。

2.根据权利要求1所述的一种乙型肝炎核酸疫苗，其特征在于其中所述的真核表达载体为pcDNA^TM3.1/V5-His B质粒。

3.一种如权利要求1或2所述的乙肝核酸疫苗的构建方法，包含以下步骤：

A、乙型肝炎病毒HBV包膜抗原、乙肝病毒核心抗原HBc与e抗原基因以及人miR181a前体基因克隆

(I)以HBV全基因组为模板，设计引物，通过PCR反应扩增得到HBV SDNA片段，引物序列如下：

S-F：ATGGAGAGCACAACATCAGG

S-F：TCAAATGTATACCCAAAGACAAAAGA

(II)以HBV全基因组为模板，设计引物，通过PCR反应扩增得到HBV C抗原与e抗原的DNA序列，引物序列如下：

C-F：ATGGACATTGACCCGTATAA

C-F：CTAACATTGAGATTCCCGAGAT

(III)以THP-1细胞基因组为模板，设计引物，通过PCR反应扩增得到miR181a前体

181F：TCGACTTGAAACCCAGAGAGG

181R：AATTCACTGGACCACATTTGG

B、将上述乙型肝炎病毒HBV包膜抗原、乙肝病毒核心抗原HBc与e抗原基因以及人miR181a前体基因插入同一真核表达载体pcDNA^TM3.1/V5-His B。

4.如权利要求1或2所述的乙肝核酸疫苗在用于制备治疗乙型肝炎药物中的应用。