[发明专利]哈夫尼菌属肌醇六磷酸酶变体在审
| 申请号： | 200980137835.9 | 申请日： | 2009-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN102165059A | 公开（公告）日： | 2011-08-24 |
| 发明（设计）人： | 泽伦·F·拉森;拉斯·K·斯科夫;伦纳多·德玛丽亚;埃斯本·P·弗里斯;松井知子;艾伦·诺尔加德;杰斯珀·文德 | 申请（专利权）人： | 诺维信公司 |
| 主分类号： | C12N9/16 | 分类号： | C12N9/16;A23K1/165 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律师事务所 11105 | 代理人： | 封新琴;史悦 |
| 地址： | 丹麦*** | 国省代码： | 丹麦;DK |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 哈夫尼菌属肌醇六 磷酸酶 变体 | ||
【说明书】：
对序列表的涉及
本申请含有计算机可读形式的序列表。将所述计算机可读形式通过提述并入本文。
发明领域
本发明涉及与源自蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)的肌醇六磷酸酶(其氨基酸序列在所附序列表中作为SEQ ID NO：2显示)具有至少76％同一性并且如与这种肌醇六磷酸酶相比包含至少一个修饰(即，为其变体)的肌醇六磷酸酶。本发明还涉及编码这些肌醇六磷酸酶的DNA，包含所述多核苷酸的核酸构建体，载体和宿主细胞以及它们的产生方法，以及它们的用途，例如在动物饲料和动物饲料添加剂中。
发明背景
背景技术
肌醇六磷酸酶是公知的酶，将它们加入动物(包括人)的食物的优点也是公知的。已经从多种来源分离了肌醇六磷酸酶，包括多种真菌和细菌菌株。
本发明的一个目的是提供具有肌醇六磷酸酶活性的可供选择的多肽(肌醇六磷酸酶)和编码所述多肽的多核苷酸。本发明的肌醇六磷酸酶变体如与亲本肌醇六磷酸酶相比展现出修饰的或改变的优选改进的性质。这些性质的非限定性实例是：稳定性(如酸稳定性，加热稳定性(heat-stability)，蒸汽稳定性，制粒稳定性(pelleting stablity)和/或蛋白酶稳定性，特别是胃蛋白酶稳定性)，温度概貌(temperature profile)，pH概貌(pH profile)，比活性，底物特异性，在动物饲料中的性能(如肌醇六磷酸盐改进的释放和/或降解)，对糖化的易感性和/或糖基化模式。
已知组氨酸酸性磷酸盐(HAP)型的肌醇六磷酸酶的多种三维结构。(例如Lim等，Nature struct.biol.7，108-113(2000))。这些肌醇六磷酸酶在结构上相关，但是在氨基酸序列上有很大差异。
PCT/EP2008/053561公开了蜂房哈夫尼菌DSM 19197的野生型HAP肌醇六磷酸酶的氨基酸序列(即，此处的SEQ ID NO：2)，在PCT/EP2008/053561中为SEQ ID NO：10。蜂房哈夫尼菌DSM 19197的野生型HAP肌醇六磷酸酶的三维结构还公开在PCT/EP2008/053561中。所述结构与已知结构充分对应。
本发明的一个目的是提供如下肌醇六磷酸酶，该肌醇六磷酸酶如与其所源自的亲本或参照肌醇六磷酸酶相比具有修饰的，优选改进的性质。
序列表概述
在序列表中，SEQ ID NO：1和2提供了蜂房哈夫尼菌DSMZ 19197肌醇六磷酸酶的DNA和氨基酸序列。
实施例概述
在本说明书中提供以下实施例：
实施例1：变体的制备和活性的测定
实施例2：比活性
实施例3：温度稳定性
实施例4：热稳定性
实施例5：温度概貌
实施例6：pH概貌
实施例7：蒸汽稳定性
实施例8：糖化残余活性(glycation residual activity)
实施例9：制粒稳定性测试
实施例10：在用于雏鸡的体外模型中于动物饲料中的性能
实施例11：在猪的体内试验中的性能
发明内容
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- 曹广祥;付加芳;马军霞;王志宇;宗工理;王世立 - 山东省医药生物技术研究中心
- 2017-01-13 - 2019-07-02 - C12N9/16
- 本发明公开了一种人骨肉瘤细胞系MG‑63在外源表达人碱性磷酸酶糖蛋白中的应用，以及rhALP的外源表达方法，包括如下步骤：(1)构建含有rhALP的重组质粒；(2)将重组质粒整合至人骨肉瘤MG‑63细胞内，获得能够表达rhALP的人骨肉瘤MG‑63细胞；(3)培养上述能够表达rhALP的人骨肉瘤MG‑63细胞，提取目的蛋白。本发明利用癌细胞MG‑63快速增殖及糖基化修饰系统的特性，通过基因工程技术利用人源癌细胞表达重组人碱性磷酸酶rhALP。本发明构建rhALP的重组表达载体，筛选能高效表达rhALP的MG‑63细胞；纯化并检测重组rhALP的糖基化状态及其生物学活性。重组rhALP的表达量和活性得到了极大的提高。
- 一种酯酶PHE14及其编码基因和应用-201610296558.8
- 胡云峰;王依龙;张云 - 中国科学院南海海洋研究所
- 2016-05-05 - 2019-06-25 - C12N9/16
- 本发明公开了一种酯酶PHE14及其编码基因和应用。本发明从海洋假单胞菌(Pseudomonadaceae oryzihabitans)HUP022中开发得到新的酯酶基因PHE14，全长为645bp，其编码的酯酶PHE14含有214个氨基酸。通过克隆酯酶基因PHE14并将其连接表达载体pET‑28a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3)，培养并诱导表达后，得到了重组表达的酯酶PHE14。酯酶PHE14可用于制备手性乳酸甲酯，利用重组表达的酯酶PHE14作为催化剂，制备得到了光学纯度大于99％的(S)‑乳酸甲酯。酯酶PHE14在生物化工和生物医药等领域具有非常大的应用价值。
- 棉花酪氨酸蛋白磷酸酶GhPTP1及其编码基因和应用-201510861157.8
- 李召虎;穆春;张明才;田晓莉;李茂营;杜明伟 - 中国农业大学
- 2015-12-01 - 2019-06-11 - C12N9/16
- 本发明公开了一种棉花酪氨酸蛋白磷酸酶GhPTP1及其编码基因和应用。本发明的棉花酪氨酸蛋白磷酸酶GhPTP1是如下a)或b)或c)的蛋白质：a)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质；b)在序列表中序列2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。通过试验证明：说明GhPTP1蛋白可以降低植物的抗逆性，尤其降低了拟南芥的抗盐性、抗旱性、渗透胁迫抗性，并能提高对ABA的敏感性，为有效提高植物耐盐抗旱性奠定良好的分子基础。
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