[发明专利]一种鉴别辣椒抗疫病性状的分子标记方法

权利要求书

1.一种鉴别辣椒抗疫病性状的分子标记方法，其特征在于，按以下步 骤进行：

1)人工设计合成一对核苷酸序列作为引物，该引物是由碱基组成的特 定序列的寡聚体，其中：

正向引物：5’-AGGTGGTCTTCAATGATCAGAGA-3’

反向引物：5’-CCTGAGGCAAATTCCAAATCTC-3’

2)提取辣椒基因组的DNA，以引物对辣椒基因组DNA进行PCR扩增， 抗疫病材料和感疫病材料均可扩增出长度为590bp的片段；

3)PCR扩增产物在37℃条件下经Bcg I酶切16h后，Bcg I酶的酶切 位点为：抗疫病品种克隆的基因序列第324bp处；酶切产物经2％琼脂糖凝 胶上电泳、溴化乙锭染色，用凝胶成像系统观察并拍照记录，抗疫病植株酶 切产物有325bp和265bp两条谱带，感疫病植株只有590bp一条谱带。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的PCR扩 增反应是：

(1)25μL PCR反应体系，由10倍PCR buffer 2.5μL，25mmo1·L^-1MgCl₂2.0μL，5U·μL^-1Taq DNA聚合酶0.2μL，5mmol·L^-1dNTPs 1.0μL，20 μmol·L^-1正向引物1.0μL，20μmol·L^-1反向引物1.0μL，基因组DNA 1.0μL， ddH₂O 16.3μL组成；

(2)PCR扩增反应在PCR仪上进行，反应条件为：94℃预变性5min； 94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸1min，进行35个循环；最 后72℃延伸10min，随后于4℃保存备用。