[发明专利]用嵌合受体灵敏且快速鉴定自身免疫疾病的方法

说明书

技术领域

本发明提供在自身免疫疾病诊断中有用的方法和组合物，尤其，本发明提供在格雷夫斯病诊断和管理中使用的方法和组合物。例如，一种组合物包含具有对循环促甲状腺激素免疫球蛋白的提高的灵敏性和特异性的嵌合促甲状腺激素受体。可在糖皮质激素存在下优化使用所述嵌合受体的测定。

背景技术

由于自身抗体对位于甲状腺上受体的识别和结合作用而导致了腺体生长和甲状腺激素过度产生，格雷夫斯病(也称为“弥漫性毒性甲状腺肿”)成为甲状腺机能亢进的主要原因。据报道格雷夫斯病为儿童和青少年甲状腺机能亢进的最常见原因(见Boter和Brown，J.Pediatr.132：612-618(1998))。

目前用于格雷夫斯病的诊断技术有许多不足之处。总的来说，商业化的方法是繁琐和辛苦的；其他方法需对需要进行诊断的人员施用放射性示踪剂。但最重要的是，目前使用的绝大多数方法缺乏足够的灵敏性以便进行快速、准确和有成本效益的检测。

仍需建立用于格雷夫斯病的安全、易于使用、灵敏、特异和有成本效益的测定系统。

发明概述

本发明提供在自身免疫疾病诊断和管理中有用的方法和组合物，尤其，本发明提供了用于格雷夫斯病诊断和治疗的方法和组合物。例如，一种组合物包含具有对循环促甲状腺激素免疫球蛋白的提高的灵敏性和特异性的嵌合促甲状腺激素受体。可在糖皮质激素存在下优化使用所述嵌合受体的测定。

在一实施方式中，本发明涉及一种方法，其包括：a)提供：i)包含稳定转染编码嵌合TSH受体和荧光素酶基因的载体的细胞系；ii)源自疑似患有格雷夫斯病的患者的血清样品；和iii)含有糖皮质激素的细胞培养基；b)在所述荧光素酶基因发出可检测信号的条件下将所述血清样品与所述细胞系及所述培养基相接触。在一实施方式中，所述方法还包含步骤c)：测量信号强度，其中所述强度与存在于样品中的促甲状腺激素受体自身抗体浓度相关。在一实施方式中，所述糖皮质激素选自：地塞米松、泼尼松、氢化可的松、氟替卡松或可的松。在一实施方式中，所述接触还包含聚乙二醇。在一实施方式中，所述嵌合TSH受体包含源自大鼠绒毛膜促性腺激素受体的氨基酸序列。在一实施方式中，所述氨基酸序列包含对应于人TSH受体氨基酸序列的第262～第335氨基酸残基的73个氨基酸。在一实施方式中，所述血清样品包含TSH受体自身抗体。在一实施方式中，所述自身抗体包含TSH刺激性自身抗体。在一实施方式中，所述自身抗体包含TSH阻断性抗体。

在一实施方式中，本发明涉及能够检测血清TSH自身抗体的包含嵌合TSH受体和荧光素-荧光素酶系统的试剂盒，其中所述系统还包含糖皮质激素。在一实施方式中，所述糖皮质激素选自：地塞米松、泼尼松、氢化可的松、氟替卡松或可的松。在一实施方式中，所述受体包含人TSH受体氨基酸序列。在一实施方式中，所述受体包含大鼠绒毛膜激素受体氨基酸序列。在一实施方式中，所述大鼠受体氨基酸序列包含第262～第335氨基酸残基。在一实施方式中，所述试剂盒还包含能够表达嵌合TSH受体和荧光素-荧光素酶系统的细胞系。在一实施方式中，所述试剂盒还包含聚乙二醇。在一实施方式中，所述试剂盒还包含编码嵌合TSH受体和荧光素酶基因的载体。在一实施方式中，所述载体还包含操控性连接到载体上的启动子。在一实施方式中，所述启动子包含糖蛋白α亚基启动子。在一实施方式中，所述细胞系包含CHO细胞。在一实施方式中，所述细胞系包含RD细胞。在一实施方式中，所述试剂盒还包含使用说明。