[发明专利]固体支持物上的靶分子的检测和/或定量

权利要求书

1.用于检测具有折光指数n1的光学透明的固体支持物表面上存在的生物靶分子的方法，所述固体支持物与具有折光指数n2的介质接触，由此n1＞n2，所述方法包括步骤：

a)照射所述靶分子，从而引起所述靶分子发射光；

b)以相对于在支持物中的所述固体支持物表面的法线的观察角θobin检测通过所述支持物从所述靶分子发射的光，从而使得90°＞θobin＞sin^-1(n2/n1)。

2.权利要求1的方法，其中所述靶分子与所述固体支持物表面上存在的捕获分子结合。

3.权利要求1或2的方法，其中具有折光指数n2的介质包括含有所述靶分子的溶液。

4.权利要求1的方法，其中所述检测的发射光在所述透明支持物内不全内反射。

5.权利要求1的方法，其中所述观察角在禁止角内，并且在临界角加10°、优选加5°且更优选加3°的范围中。

6.权利要求1的方法，其中所述固体支持物的折光指数高于1.33。

7.权利要求3的方法，其中所述溶液包含在封闭室中。

8.权利要求3的方法，其中对于从所述可溶靶分子发射的光以禁止角检测从所述结合靶分子发射的光。

9.权利要求3的方法，其中所述观察角允许检测从所述结合靶分子发射的光信号，这比从所述可溶靶分子发射的光信号高至少10倍、更佳50倍且甚至更佳100倍。

10.权利要求1的方法，其中通过所述支持物从所述结合靶分子发射的光通过发射的消散波产生。

11.权利要求1的方法，其中所述靶分子用选自下述的染料进行标记：荧光的、发磷光的、量子点或有色分子。

12.权利要求1的方法，其中所述生物靶分子选自核酸或蛋白质。

13.权利要求12的方法，其中所述蛋白质选自抗体、抗原、配体、受体。

14.权利要求12的方法，其中所述捕获分子是10至1000个碱基的多核苷酸。

15.权利要求14的方法，其中所述捕获分子包括具有10至100个核苷酸的特定捕获部分和间隔物的多核苷酸序列，所述特定捕获部分与待检测的所述特定靶序列互补。

16.权利要求14的方法，其中所述间隔物是长为至少约20个核苷酸、至少40或约70个核苷酸且优选长为至少约90个核苷酸的多核苷酸。

17.权利要求1的方法，其中所述固体支持物包括根据微阵列在其表面的限定位置中固定的多重捕获分子。

18.权利要求17的方法，其中所述微阵列包括超过5种不同捕获分子、优选超过20种且甚至超过50种。

19.权利要求17的方法，其中限定位置的发射表面包括在1m²和1mm²之间。

20.权利要求1的方法，其中所述光源产生光束用于将光导向固体支持物的表面上。

21.权利要求1的方法，其中通过在限定位置处具有固定的捕获分子的支持物表面接受的光在2个位置内改变不超过10％，并且优选不超过5％。

22.权利要求1的方法，其中所述光源产生固体支持物表面的消散激发。

23.权利要求3的方法，其中含有靶分子的溶液的温度保持恒定，其中温度变化小于5℃、优选小于1℃。

24.权利要求3的方法，其中含有靶分子的溶液接受具有至少2个且优选3个不同温度的温度循环。

25.权利要求23的方法，其中所述温度循环是产生PCR的那些。

26.权利要求1的方法，其中所述固体支持物的表面在高于85℃的温度下维持平坦，并且其中所述固体支持物在用于检测所述靶的激发和发射波长下显示低自身荧光。

27.权利要求1的方法，其中在靶和捕获分子之间的结合事件过程中执行所述检测。