[发明专利]戊型肝炎病毒抗原、其抗原组合物、及其含有该抗原或抗原组合物的试剂盒和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种肝炎病毒抗原，尤其涉及一种戊型肝炎病毒抗原、其抗原组合 物、及其含有该抗原或抗原组合物的试剂盒和应用。

背景技术

HEV是一种无包膜的单股正链RNA病毒，基因组全长约7.2kb，有三个开放型 读码框(ORF)，从5’端依次为非编码区(NCR)、ORF1、ORF2、ORF3和3’端非 编码区及PolyA尾巴。其中ORF3与ORF1C末断的一个氨基酸和ORF2的N端部 分氨基酸重叠。ORF1编码1690个氨基酸，主要是与病毒复制相关的非结构蛋白。 ORF2编码660个氨基酸，为病毒的结构蛋白。ORF3编码123个氨基酸，功能尚不 太清楚。目前国际病毒分类委员会(ICTV)暂未对其进行准确分类。Lu(Lu L，Li CH， Hagedorn.2006.Phylogenetic analysis of global hepatitis E virus sequences：genetic diversity，subtypes and zoonosis.Rev Med Virol 16：5-36.)等对Genbank中421个 HEV的核苷酸序列进行了分析，HEV主要分为4个基因型，而且具有明显的地域性。 1型主要分布在亚洲和非洲等发展中国家，2型主要分布在墨西哥，3型主要在欧洲 以及美洲等发达国家，4型主要在亚洲。中国即有1型，也有4型的流行。目前从猪 等动物中分离出了大量的HEV 3型和4型的病毒株，认为HEV 3型和4型是人畜共 患性，但1型和2型是否是人畜共患性传染病尚需进一步研究。

戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的一种非甲非乙型病毒性肝炎。 HE属典型的自限型疾病，急性肝炎期约持续一到四周，一般不会发展成慢性肝炎。 主要经粪—口途径传播，既有散发，也有流行，在卫生条件差的地区常引起大规模 爆发流行，主要由水源污染所引起。感染率在15～40岁青壮年最高，孕妇感染HEV 后死亡率可达20％，尤其是怀孕三个月左右的孕妇致死率甚至高达25％，幸存者也 有着较高的流产率和死胎率。接触传染的几率较低，有可能存在垂直传播和血液传 播。HE在亚洲、非洲和美洲等发展中国家人群中发生比较普遍，在一些地区可占到 急性病毒性肝炎的50％，是导致发病和病死的重要因素。在一些非HE流行的国家 的献血员中HEV抗体阳性率达1～5％。在非HE流行区的养猪者和与猪密切接触的 兽医中，抗HEV抗体阳性率远高于普通献血员。

血清学和核酸检测是戊型肝炎流行病学和临床诊断的主要方法。其中前者主要 是检测血清中的抗HEV抗体：IgM，IgG和IgA；核酸检测主要是通过检测血清， 胆汁和粪便中的HEV RNA.，这些检测可以互补用于帮助临床区别新近感染和既往 感染，以减少误诊。

现有的戊型肝炎病原学检测主要有以下几种方法：

1.免疫学检测

免疫学检测的方法主要针对抗HEV抗体，采用酶联免疫检测方法，检测血清中 的抗HEV IgM，IgG和IgA抗体。

抗HEV IgG出现的较早，在急性期滴度升高，持续时间长，目前其检测主要采 用间接ELISA法，利用重组的ORF2和ORF3抗原进行检测。世界范围内使用较为 普遍的商业化试剂为Genelab公司和Abott公司的检测试剂盒。他们均采用HEV1 型和2型抗原为检测抗原。但是，由于抗HEV IgG抗体持续时间较长，所以无法区 别既往感染和近期感染。

Chau et al认为，IgA抗体也可以作为HEV近期或急性感染的标识抗体，虽然其 阳性持续时间与HEV诊断中的意义还有待临床和流行病学研究的进一步证实。但是， 在急性期感染的诊断中，IgA的检测可以作为IgM检测的辅助试验，确证诊断。

通常认为，IgM作为急性感染最重要的标志性抗体出现的要比IgG早。一个理 想的IgM检测试剂应该具有以下特点：灵敏，假阳性率低，持续时间短，能够区别 近期感染和既往感染。目前国内市面上广泛应用的商业化试剂是新加坡Genelab公司 和北京的万泰公司所产。而大多数试剂所采用的抗原都是ORF2的C端和部分或全 长的ORF3抗原。

另外，Zhang et al还报道了利用组合的单克隆抗体检测血清中的HEV抗原的方 法来诊断急性感染。其ELISA使用的是源于1型和4型的ORF2抗原。

2.分子生物学检测