[发明专利]杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺

权利要求书

1.杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺，其特征是包括如下步骤：

(1)准备菌株和培养基

菌株：基因工程菌甲醇毕赤酵母PMAD16/pMETαA-Lccl；

发酵培养基：15～30g/L蛋白胨，5～30g/L葡萄糖，5～20g/L酵母粉，10～25g/L酵母氮源，3×10^-4～7×10^-4g/L生物素，0.1～0.6mmol/L的Cu²⁺，用pH为4.0～7.0的浓度为100mmol/L的磷酸盐缓冲液配制；

(2)基因工程菌生长培养

将活化的菌种甲醇毕赤酵母PMAD16/pMETαA-Lccl接种在经灭菌的所述发酵培养基中，在温度25～31℃下，振荡或搅拌培养15-36h；

(3)基因工程菌的诱导培养

间歇或流加含3×10^-4～7×10^-4g/L生物素的甲醇进行诱导培养，使甲醇终体积浓度为0.2～2.0％，温度15～30℃，诱导时间96～216h，得到杂色云芝重组漆酶。

2.根据权利要求1所述的杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺，其特征在于所述的发酵培养基为：20～25g/L蛋白胨，10～20g/L葡萄糖，10～15g/L酵母粉，15～23g/L酵母氮源，4×10^-4～6×10^-4g/L生物素，0.2～0.4mmol/L的Cu²⁺，用pH为5～7的浓度为100mmol/L的磷酸盐缓冲液配制。

3.根据权利要求1或2所述的杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺，其特征在于所述的Cu²⁺为硫酸铜或氯化铜中的离子。

4.根据权利要求1所述的杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺，其特征在于所述步骤(2)为：将活化的菌种甲醇毕赤酵母PMAD16/pMETαA-Lccl接种在经灭菌的所述发酵培养基中，在温度28～30℃下，振荡或搅拌培养20-30h；

5.根据权利要求1所述的杂色云芝漆酶在甲醇毕赤酵母中异源表达发酵工艺，其特征在于所述步骤(3)为：间歇或流加含5×10^-4～6×10^-4g/L生物素的甲醇进行诱导培养，使甲醇终体积浓度为0.5～1.3％，温度18～25℃，诱导时间108～156h。