[发明专利]乙肝病毒多态性检测芯片的制作方法及其应用

权利要求书

1、一种乙肝病毒基因多态性检测芯片，其特征在于设计15-20聚探针，探针的Tm值(解链温度)基本相同，突变位点尽可能位于序列中间。

针对前核心区设计的探针为：               长度             Tm

  TGGCTTTGGGGCAT                        14              50

  TGGCTTTaGGGCATG                       15              47.48

  TGGCTTTaGGaCATGGA                     17              16

  GCTTTGGGaCATGGAC                      17              49.45

针对基因型区设计的探针为：

  ACCATGCAAGACCTGC                      16              48.77

  CATGCCGGACCTGC                        14              50.47

  TTCGCAAAATTCCTATG                     17              47.41

  TTTGGCAAGATTCCTATG                    18              49.54

通过点样仪转移到醛基修饰的玻片上，经SDS，硼氢化钠溶液，纯水处理制成。

2、一种乙肝病毒基因多态性检测芯片制作方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)载玻片的修饰；

(2)探针设计及合成；

(3)探针的固定。

3、根据权利要求2所述的乙肝病毒基因多态性检测芯片制作方法，其特征在于：载玻片用1-3mol/L NaOH的50％-95％乙醇溶液中浸泡1-4小时85-150℃烘干，冷却到室温，置于0.2％-2％的3-氨丙基三甲氧基硅烷95％丙酮溶液中浸泡2-10分钟，取出用丙酮冼，80-150℃烘0.5-1.5小时，冷到室温，然后将玻片浸入0.1-0.2mol/L磷酸钾溶液和5ml的25-40％戊二醛溶液的混合液中4小时，取出玻片，置75-85％相对湿度30℃10小时.然后用水冲洗室温晾干。

4、根据权利要求2所述的乙肝病毒基因多态性检测芯片制作方法，其特征在于寡核苷酸的5′端加上一段连接臂(polyT)，连接臂的长度为8-20聚时，5′端进行氨基修饰。

5、根据权利要求2所述的乙肝病毒基因多态性检测芯片制作方法，其特征在于将探针稀释30-40p mol/μl通过点样仪转移到醛基修饰的玻片上，再经25℃，75％相对湿度的环境中放3天。室温下将玻片浸于0.2％SDS振摇数分钟，然后，玻片浸入纯水中振摇数分钟，室温干燥数分钟。再浸入硼氢化钠溶液中振摇数分钟，再浸于0.2％是SDS三次，每次1分钟，玻片浸于纯水中。

6、根据权利要求1所述的乙肝病毒基因多态性检测芯片的应用，其特征在于根据乙肝病毒基因分型、突变及耐药性信息设计探针，用荧光标记，全基因法扩增乙肝病毒DNA与芯片杂交从而得到乙肝病毒的相关性信息。

7、根据权利要求1所述的乙肝病毒基因多态性检测芯片的应用，其特征在于根据丙肝病毒的分型信息，设计相应的探针作为阴性对照，应用于检测丙肝病毒的基因分型。

8、根据权利要求6所述的乙肝病毒基因多态性检测芯片的应用，其特征在于乙肝病毒DNA样品处理方法为全基因扩增样品并加上荧光标记，然后用核酸酶切断成适当长度；或者全基因扩增样品，然后用核酸酶切断成合适长度后，再用末端标记法加上荧光标记。