本发明公开了构建MKRN3基因突变的先天性中枢性性早熟模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了一种制备重组细胞的方法,包括如下步骤:将SEQ ID NO:16所示MKRN3‑gRNA3、SEQ ID NO:17所示MKRN3‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞,得到重组细胞。本发明采用CRISPR/Cas9技术联合双gRNA编辑进行了MKRN3基因的敲除,模拟中枢性性早熟、中枢性性早熟合并肺癌的自然发病遗传特征,并获得了MKRN3基因敲除的单细胞克隆,为后期通过体细胞核移植动物克隆技术培育中枢性性早熟
本发明提供了一种非人哺乳动物性早熟动物模型的建立方法及其用途,具体地,本发明提供了一种非人哺乳动物的性早熟动物模型的制备方法,该方法包括以下步骤:(a)提供非人哺乳动物的细胞,将所述细胞中的MKRN3(环指蛋白3基因,Makorin Ring Finger Protein 3)基因失活,得到MKRN3基因失活的非人哺乳动物细胞;和(b)利用步骤(a)中得到的MKRN3基因失活的细胞,制备得到MKRN3