本发明涉及医疗技术领域,提供了一种用于新型布尼亚病毒检测的CrRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示,用于引导Cas12a蛋白结合至LAMP扩增产物并反式切割,从而实现病毒疾病的早期检测。本发明还提供了一种CRISPR‑Cas12a系统以及基于CRISPR‑Cas12a快速检测新型布尼亚病毒的方法。同时,本发明还提供了一种CRISPR‑Cas12a系统在制备新型布尼亚病毒检测试剂盒中的应用。
本发明提供了一种检测基因编辑水稻wx突变基因的方法,所述方法包括将待测核酸与Cas12a蛋白、gRNA和单链DNA报告子接触,检测由Cas12a蛋白切割单链DNA报告子产生的可检测信号,所述gRNA包括与Cas12a蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列,从而检测所述基因编辑水稻wx突变基因,所述单链DNA报告子不与所述gRNA杂交;所述gRNA的序列如SEQ ID No.10或SEQ ID No.11
本发明公开了基于RPA‑CRISPR/Cas12a系统的华支睾吸虫可视化快速检测试剂盒及方法,试剂盒包括:一对用于扩增华支睾吸虫COX‑1基因保守序列的特异性RPA引物、Cas12a蛋白、用于CRISPR/Cas12a反应的缓冲液、crRNA、荧光报告基团、侧向流免疫层析报告基团以及Cas12/13通用侧向流免疫层析试纸条。其中,所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:10和15所示,用于CRISPR/Cas12a反应的crRNA互补的DNA核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示;本发明快速、灵敏、特异性良好且结果肉眼可视