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[发明专利]一种由DNA连接的新型酶-金属有机框架复合材料@纤维素膜及其制备方法和应用-CN202310697816.3在审
发明人：张幸;高婉柠;郑洁;李昺之 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2023-06-13 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N11/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种由DNA连接的新型酶‑金属有机框架复合材料@纤维素膜及其制备方法和应用，由Ni合成新型金属有机框架作为固定化材料，将生物酶利用原位合成的固定化方式固定在其内部，制备得到酶‑金属有机框架复合催化材料，再利用DNA将酶‑金属有机框架复合催化材料固定在细菌纤维素膜上，实现复合材料均匀、稳定、大量的富集在纤维素膜上，并将酶‑金属有机框架复合材料@纤维素膜应用于不同生物酶的催化反应中。本发明所制备复合膜能够控制纳米颗粒的生长、颗粒大小及分布的均匀性等，从而在保证酶活性的情况下实现膜上材料的富集，并可适用于多种生物酶的催化体系，提高系统稳定性，重复利用率，可操作性，连续性，实际应用便捷性。
一种 dna 连接新型金属有机框架复合材料纤维素及其制备方法应用

[发明专利]一种基于T3 DNA连接酶的镉离子检测方法-CN202110365775.9有效
发明人： 李昺之;张幸;锁缇莹;谢思盈;吉峙润 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2021-04-06 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于T3 DNA连接酶的镉离子检测方法，它是通过设计一种DNA模板，当目标物镉离子存在的情况下，目标物拉近了链两端的距离，使得3’端和5’端互补配对，形成平末端；在T3 DNA连接酶的作用下，使该模板环化；再加入一段与环状模板互补配对的寡核苷酸链，作为后续扩增反应的引物；在加入phi 29 DNA聚合酶的作用下，开启滚环扩增反应，得到较长的一段核苷酸链条；在得到的产物中加入荧光染料SYBR Green I，使染料插入到DNA链条中，在517‑537nm的激发波长下，用紫外分光光度计进行检测样品，然后在487‑507nm的激发波下测得荧光强度；使用Real‑Time PCR方法对镉离子进行检测，验证本发明的方法的准确性。
一种基于 t3 dna 连接酶离子检测方法

[发明专利]一种改性g-C3-CN202111267186.3有效
发明人：林蕾;张幸;李昺之;林潇;王秋苏 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2021-10-28 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C09K11/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种改性g‑C3N4@MOF荧光复合材料及其制备方法和应用，改性g‑C3N4@MOF为g‑C3N4‑O@MOF，是将氧掺杂的石墨相氮化碳g‑C3N4‑O与金属中心离子和有机配体原位合成的g‑C3N4‑O@MOF荧光复合材料。本发明的基于改性g‑C3N4@MOF荧光复合材料构建的荧光传感器，无需任何化学标记和荧光染料的添加，操作简便，灵敏度、可重复性以及稳定性都很高，可在复杂样品中实现特异性检测，具有良好的经济实用价值，有望应用于医疗、环境、食品及畜牧养殖业中抗生素的检测。
一种改性 base sub

[发明专利]一种生物传感器检测转录因子NF-κB p50的方法-CN202110289874.3有效
发明人： 李昺之;张幸;谢思盈;罗毅轩;吉峙润 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2021-03-18 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C12Q1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种生物传感器检测转录因子NF‑κB p50的方法，该方法将带有PAM结构域的双链DNA作为激活序列，与测试样品和反应缓冲液混合孵育后，将核酸外切酶III(Exo III)及反应缓冲液添加到溶液中，孵育，再将配置好的CRISPR报告溶液(CRM)加入溶液中以启动CRISPR反应，测量所得的样品的荧光，最后根据不同浓度的测试样品的荧光值绘制浓度与荧光强度之间的关系图，检测样品的荧光值并代入回归曲线，计算出NF‑κB p50的浓度。本发明的NF‑κB p50检测方法具有灵敏度高，选择性强，成本低的优点，能够实现肿瘤中的NF‑κB p50高效检测及对于NF‑κB p50抑制性药物的筛选和评估。
一种生物传感器检测转录因子 nf p50 方法

[发明专利]CRISPR-Cas12a-金属有机框架复合检测材料及其制备方法和应用-CN202310192112.0在审
发明人：周彬;杨润琳;范俊;郭明明;李昺之;周衍;吉峙润;张艺;张珏;李文新;马骐 -专利权人：江苏省原子医学研究所
申请日： 2023-03-02 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： C12N11/14 文献下载
摘要：本发明公开了CRISPR‑Cas12a‑金属有机框架复合检测材料制备方法和应用，本发明复合催化材料以金属有机框架作为一种新型的固定化酶材料，将CRISPR‑Cas12a吸附在其表面形成。本发明制备的得到CRISPR‑Cas12a‑金属有机框架复合材料后，将其加入含有待检测样品以及探针分子的混合溶液中，crRNA和Cas12a蛋白形成复合体；复合体识别并结合靶序列后，Cas蛋白的附属切割活性被激活，从而切割探针分子引起光信号变化。本发明的复合检测材料操作方便快捷，不仅具有良好的热稳定性和化学稳定性，还能提高检测灵敏度，并可以实现常温储存同时保持较高的检测活性。
crispr cas12a 金属有机框架复合检测材料及其制备方法应用

[发明专利]一种RPA-Cas12a一锅法检测系统及其应用-CN202310288775.2在审
发明人：黄和;王佩;杨莎;林蕾;张幸;李昺之 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2023-03-22 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种RPA‑Cas12a一锅法快速检测系统及其应用，该系统包括RPA预混液和CRISPR‑Cas12a预混液；CRISPR‑Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和crRNA；crRNA为基于次优PAM序列设计的能引导Cas12a靶向识别AHPND RPA产物的特异性向导RNA序列。本发明设计了特异性crRNA，降低Cas12a的切割效率，使RPA扩增过程与CRISPR‑Cas12a特异性切割过程同时在一管中反应，避免了两步法中转移RPA扩增产物潜在的污染风险及繁琐步骤，灵敏度高、稳定性好，为水产养殖业提供了高灵敏度、高准确性、稳定性好、简便快捷的AHPND现场检测方法。
一种 rpa cas12a 一锅检测系统及其应用

[发明专利]RPA-Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用-CN202210819822.7在审
发明人：陈国祥;王佩;张幸;李昺之 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2022-07-12 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种RPA‑Cas12a检测系统及其在肝胰腺坏死病检测中的应用，该系统包括Cas12a预混液和用于扩增RPA产物引物和试剂，Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和crRNA；ssDNA为两端分别修饰有荧光基团FAM和猝灭基团BHQ1的单链DNA；crRNA为能引导Cas12a靶向识别AHPND RPA产物的向导RNA序列。本发明将RPA高扩增性能与CRISPR‑Cas12a高特异性相结合构建了RPA‑CRISPR检测方法，其灵敏度高、稳定性好，为水产养殖业如对虾养殖、螃蟹养殖等提供了一种高灵敏度、高准确性、稳定性好的AHPND现场检测方法。
rpa cas12a 检测系统及其胰腺坏死中的应用

[发明专利]一种DNA连接反应与滚环扩增联用的生物传感器检测结构特异性核酸酶FEN1的方法-CN202011472708.9有效
发明人： 李昺之;张幸;夏安祺;吉峙润;谢思盈;锁缇莹;罗毅轩 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2020-12-15 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种DNA连接反应与滚环扩增联用的生物传感器检测结构特异性核酸酶FEN1的方法，该方法将带有5’端序列片段的哑铃状DNA探针、测试样品和反应缓冲液混合孵育，然后，将T4DNA连接酶及反应缓冲液添加到溶液中，孵育，再将引物和RCA混合物滴入上述所得的样品中以启动RCA反应，测量上述所得的样品的荧光，最后检测不同浓度的测试样品的荧光值绘制浓度与荧光强度之间的关系图，检测待测样品的荧光值，代入关系图计算出FEN1的浓度。本发明的FEN1检测方法具有灵敏度高，选择性强，成本低的优点，能够实现肿瘤中的FEN1高效检测。
一种 dna 连接反应扩增联用生物传感器检测结构特异性核酸酶 fen1 方法

[发明专利]一种诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法-CN202010720349.8有效
发明人：黄和;李昺之;张幸;锁缇莹;张世林;谢思盈;夏安祺 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2020-07-24 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种诱导型变构探针结合滚环扩增的镉离子传感方法，该方法可以实现对微量镉离子的高灵敏性和特异型的检测。空气、水、土壤中潜在的重金属污染无处不在，严重影响了人们的生活质量和身体健康。重金属离子镉是粮食污染中一种常见的重金属。镉很易蓄积在人体的肾脏、骨组织、眼睛和其他器官组织中，尤其在肾脏和骨组织中的蓄积现象最为严重，可引发肾衰竭、易碎性骨折等疾病，威胁人体健康。由于及其微量的镉离子也会造成人体的严重损伤，所以对于环境的保护以及食品的安全具有重大意义。
一种诱导型变构探针结合扩增离子传感方法

[发明专利]一种基于环形变构DNA电化学反应检测微囊藻毒素的方法-CN202010720347.9有效
发明人：黄和;李昺之;张幸;锁缇莹;夏安祺;谢思盈;张世林 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2020-07-24 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： G01N27/48 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于环形变构DNA电化学反应检测微囊藻毒素的方法，该方法将DNA探针连接在金电极上，然后将中间插入微囊藻毒素适配体的环状DNA序列与金电极上的DNA探针混合孵育形成复合物；其中，环形DNA序列的两个末端分别与金电极上的DNA探针互补；加入样品溶液与复合物进行共孵育，然后依次加入T4 DNA连接酶和Phi 29 DNA聚合酶，再通过检测加入离子后金电极的电流信号的强弱，实现对目标物的定量检测。本方法制备简单，反应快速，对样品的要求不高，具有较高的灵敏度和特异性，有利于快速的检测出微囊藻毒素的含量。
一种基于环形 dna 电化学反应检测微囊藻毒素方法

[发明专利]一种固定化多酶材料及其制备方法和应用-CN202211340334.4在审
发明人：黄和;张幸;郑洁;徐涵;李昺之;林雅玫 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2022-10-28 - 公布日： 2023-01-10 - 主分类号： C12N11/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种固定化多酶材料及其制备方法和应用，固定化多酶材料包括第一酶、第二酶和第三酶，第一酶与第二酶固定于ZIF‑90内部，第三酶固定于ZIF‑90表面；第一酶为N‑乙酰氨基己糖1‑位激酶，第二酶为尿苷转移酶，第三酶包括聚磷酸激酶、肝素合酶、透明质酸合酶、软骨素聚合酶或者N‑乙酰氨基葡萄糖转移酶。本发明固定化多酶材料能够缩短底物的传输距离和反应时间，减少了中间物的积累和抑制，从而显著提升整个多酶级联反应的催化效率，能够适用于多种糖类的合成，并且固定化多酶体系具有良好稳定性，能够实现酶的回收利用，并且可以多次循环使用，大大降低了催化反应所需投入的酶用量，减少生产成本。
一种固定化多酶材料及其制备方法应用

[发明专利]一种利用包含分裂适配体的纳米簇信标型荧光传感器检测目标物的方法-CN202010512037.8有效
发明人：张幸;李昺之;陈月;林蕾;夏安琪;张世林;锁缇莹 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2020-06-08 - 公布日： 2022-12-20 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用包含分裂适配体的纳米簇信标型荧光传感器检测目标物的方法，将分裂适配体与纳米簇信标相融合制备AgNCs‑Apt1，将AgNCs‑Apt1溶液、富含鸟嘌呤增强子序列的GRS‑Apt2溶液、含有不同浓度目标物的样品分别与Tris‑HCl缓冲液混合反应，记录发射波长下所得样品的荧光强度；绘制关系曲线图，计算目标物分子的浓度与荧光强度之间的关系式；利用关系式计算待测血清样品中的目标物分子浓度。由于银纳米簇具有可调的荧光特性以及分裂适配体对目标物的特异性识别，该传感器可以实现对多种目标物的特异性检测，通过改变适配体序列，可以拓宽该策略的应用范围。本发明具有免标记，无酶，灵敏度高的优点，能够灵敏的检测出生物样品中的目标物含量。
一种利用包含分裂适配体纳米信标荧光传感器检测目标方法

[发明专利]一种基于适配体的重金属镉电化学传感器及其制备方法-CN202110365780.X有效
发明人：黄和;江凌;徐生盼;张幸;李昺之 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2021-04-06 - 公布日： 2022-11-08 - 主分类号： G01N27/26 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于适配体的重金属镉电化学传感器及其制备方法，该传感器首先基于电沉积的方法，在导电玻璃(ITO)表面修饰花状纳米金，以增加传感器比表面积和导电速率，同时基于Au‑S键合作用，在ITO表面连接上巯基化修饰的镉离子适配体，构建镉离子电化学检测传感界面，通过计时电量法计算得到镉离子的吸附量。
一种基于适配体重金属电化学传感器及其制备方法

[发明专利]DNA纳米技术与液相色谱联用的转录因子多通路检测方法-CN202010015149.2有效
发明人：周学敏;李昺之;陈月;严孝强;朱婉莹;王晶;卢巧云;洪俊丽 -专利权人：南京医科大学
申请日： 2020-01-07 - 公布日： 2022-10-04 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种DNA纳米技术与液相色谱技术联用的转录因子多通路检测方法，该方法为：先用捕获有待测转录因子的探针修饰的磁珠捕获待测转录因子，将捕获的待测转录因子与对应掩蔽链序列结合，将待测转录因子的信号转化为核酸信号的释放；然后核酸信号在对应扩增模板、Bst 2.0 DNA聚合酶、Nt.BstNBI核酸内切酶的作用下触发多通路等温扩增，产生具有多种编码的寡核苷酸作为信号DNA；最后采用高效液相色谱检测信号DNA，得到待测转录因子的浓度。本发明检测方法过程简单，能够一次性同时检测多种待测转录因子，实现了多目标检测，在多通路检测中获得良好的检测结果，本发明检测方法方便、可靠地对不同保留行为的DNA报告进行定量定性分析，提高了检测效率。
dna 纳米技术色谱联用转录因子通路检测方法

[发明专利]基于N-Ti3-CN201911045410.7有效
发明人：周学敏;朱婉莹;卢巧云;王晶;李昺之;翁晨园;李晓芸;杨威;严孝强 -专利权人：南京医科大学
申请日： 2019-10-30 - 公布日： 2022-08-23 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于基于N‑Ti3C2QDs与邻苯二胺氧化物的复合纳米探针，并公开了该探针用于H2O2和黄嘌呤的比率荧光检测方法，该探针是由N‑Ti3C2QDs与DAP通过π‑π共轭和氢键结合形成的用于H2O2或黄嘌呤的比率荧光检测的复合纳米探针。本发明首次应用MXene二维材料合成的量子点建立基于光诱导电子转移效应(PET)的H2O2的双发射反向比率荧光传感平台。并且，基于黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶的特异性催化下产生H2O2的作用，实现了黄嘌呤的比率荧光检测。本发明中的检测方法具有免标记、高灵敏度、高准确性、低成本检测的优点，具有良好的应用前景。
基于 ti base sub

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