本发明公开了一种黑眶蟾蜍丝氨酸蛋白酶抑制剂及其基因，该黑眶蟾蜍丝氨酸蛋白酶抑制剂的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，编码黑眶蟾蜍丝氨酸蛋白酶抑制剂的基因核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，本发明通过原核表达手段获得的黑眶蟾蜍丝氨酸蛋白酶抑制剂具有很强的胰蛋白酶抑制活性，并且还具有体外生产方便、抑制胰蛋白酶活性强大的特点，可做为胰蛋白酶抑制剂进行应用。
本发明提供了一组具有胰蛋白酶抗性的抗菌肽及其制备办法。利用蛋白质定向改造技术，针对NZ2114序列中存在的六处胰蛋白酶活性位点进行有选择突变。设计氨基酸序列为SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：33的胰蛋白酶抗性突变体并实现其在毕赤酵母中的重组表达。本发明首次实现NZ2114抗胰蛋白酶衍生物的设计，经测定部分突变体(尤其是双突变体和全部三突变体)胰蛋白酶降解率显著改善，为16.67％‑25％。胰蛋白酶抗性抗菌肽对金黄色葡萄球菌ATCC25923，ATCC43300和ATCC6538具有显著抑菌活性，MIC介于0.25‑16μg/ml。本发明所述方法获得的胰蛋白酶抗性抗菌肽可应用于抗菌药物、食品添加剂、化妆品、饲料添加剂等领域，具有广阔的应用价值和市场前景。
