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[发明专利]一种下调微小RNA-126表达的方法-CN201310543832.3无效
发明人：徐林;胡燕;周涯;李永菊;廖珍媛 -专利权人：遵义医学院
申请日： 2013-11-06 - 公布日： 2014-09-10 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种下调微小RNA-126表达的方法，它明利用分子生物学技术，在含CMV启动子的真核载体基础上，构建含miR-126-sponge的真核表达载体，实现下调miR-126的表达；并通过将该载体体外转染真核细胞后，利用荧光定量PCR仪检测miR-126成熟体的表达，同时通过体外实验观察下调miR-126表达后的生物学效应。这样的方法不仅可以方便、快速、长效地下调miR-126的表达，同时还可快捷地观察miR-126下调表达后的生物学效应。不仅适于细胞的转染，也可用于整体水平转基因动物的制作。
一种下调微小 rna 126 表达方法

[发明专利]带有稳定表达猪干扰素α基因的哺乳动物细胞系及其制备方法-CN201210005743.9无效
发明人：夏平安;慕春龙;卢晓艳;崔保安 -专利权人：河南农业大学
申请日： 2012-01-10 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了带有稳定表达猪干扰素α基因的哺乳动物细胞系及其制备方法，建立一种完整猪α干扰素基因的克隆、重组真核表达载体的构建以及稳定表达猪α干扰素的真核细胞系，将克隆的猪α干扰素cDNA基因插入到pcDNA3.0载体中构建真核表达载体pcDNA-poIFNα，通过脂质体转染猪PK15细胞，经G418筛选后用荧光定量PCR和ELISA方法分别检测猪α干扰素mRNA及蛋白的表达水平，构建了稳定表达猪α干扰素的PK15采用一系列方法对获得的细胞在基因水平、转录水平和翻译表达水平进行鉴定。
带有稳定表达干扰素基因哺乳动物细胞系及其制备方法

[发明专利]基于沙门氏菌的DNA疫苗联合抗生素-CN202180008543.6在审
发明人：海因茨·卢本奥 -专利权人：万科斯蒙股份有限公司
申请日： 2021-01-12 - 公布日： 2022-08-30 - 主分类号： A61K31/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种伤寒沙门氏菌Ty21a菌株，其包含DNA分子，所述DNA分子包含至少一种真核表达盒，所述至少一种真核表达盒编码至少一种肿瘤抗原、基质抗原和/或检查点抑制剂抗原，所述菌株用于在用抗生素治疗后治疗人类受试者的癌症
基于沙门氏菌 dna 疫苗联合抗生素

[发明专利]白洗猪LYRM1基因真核载体的构建方法-CN201810209823.3在审
发明人：陈祥;苑红霞;韦仕南;骆金红 -专利权人：贵州大学
申请日： 2018-03-14 - 公布日： 2018-07-27 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种白洗猪LYRM1基因真核载体的构建方法。本发明能在构建白洗猪LYRM1基因真核载体时，免除从组织中提取蛋白的繁琐步骤，简化操作。本发明通过简单的方法克隆白洗猪LYRM1基因并构建真核表达载体，为白洗猪基因检测方法的建立提供基础，可从细胞生物学探究LYRM1蛋白对脂肪形成的影响，为白洗猪的从分子选种培育提供理论依据。
构建真核载体基因蛋白细胞生物学真核表达载体繁琐步骤脂肪形成猪基因选种克隆检测培育

[发明专利]一种提高水稻香味物质含量的基因真核重组质粒及应用-CN201110344013.7有效
发明人：刘永胜;唐维;牛向丽;张黎 -专利权人：合肥工业大学
申请日： 2011-11-04 - 公布日： 2012-03-07 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高水稻香味物质含量的基因真核重组质粒，其核苷酸序列如序列表中SEQIDNO：1所示。通过同源序列比对筛选并克隆了提高水稻香气的基因OsBadh1。将OsBadh1基因片段正向和反向插入真核载体，获得本发明所述真核重组质粒。将上述真核重组质粒转化水稻，获得转基因植株。实验表明：本发明所述的OsBadh1基因在水稻幼根，幼苗，幼穗，成熟植株根、茎、叶、花组织中均表达；OsBadh1基因的下调可以提高水稻主要香气成分2-乙酰吡咯啉的含量。
一种提高水稻香味物质含量基因重组质粒应用

[发明专利]戊糖的发酵-CN03802659.7有效
发明人：胡贝图斯·约翰内斯·玛丽·奥普登坎普;哈里·拉曼厄德·哈尔汉吉;克里斯蒂安·范德德里夫特;雅各布斯·托马斯·普龙克 -专利权人：皇家奈达尔科股份有限公司
申请日： 2003-01-23 - 公布日： 2005-11-30 - 主分类号： C12N15/61 文献下载
摘要：本发明涉及用来自厌氧真菌的编码真核生物的木糖异构酶的核酸序列转化的宿主细胞。当该编码真核生物木糖异构酶的序列被表达时，赋予宿主细胞将木糖转化为木酮糖的能力，木酮糖进一步被宿主细胞代谢。宿主细胞优选为真核微生物如酵母或丝状真菌。本发明还涉及制备发酵产物如乙醇的方法，其中本发明的宿主细胞利用木糖生长并产生发酵产物。本发明还涉及编码可以从厌氧真菌中获得的真核生物木糖异构酶和木酮糖激酶的核酸序列。
戊糖发酵

[发明专利]一种猪新基因BCL-G_L多克隆抗体的制备方法-CN201010198346.9无效
发明人：蒋朋飞;张德礼 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2010-06-12 - 公布日： 2011-02-02 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪新基因BCL-GL多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：A1：猪BCL-GL基因的克隆；A2：原核表达载体pET32a-BCL-GL的构建；A3：真核表达载体pEGFP-BCL-GL的构建；A4：BCL-GL蛋白的原核表达；A5：BCL-GL蛋白的纯化和豚鼠抗BCL-GL多克隆抗体的制备。
种猪基因 bcl sub 克隆抗体制备方法

[发明专利]一种基因构建重组质粒pEGFP-GRE-GP5gB及应用-CN202011130455.7有效
发明人：金天明;李丹;蓝肇煜;王小月;武静桥;姚景丽;范真玮;何敬文;陈婷;赵微 -专利权人：天津农学院
申请日： 2020-10-21 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及一种PRRSV GP5片段、表位预测序列GRE及PRV gB基因三联表位基因重组真核表达质粒pEGFP‑GRE‑GP5gB，其构建步骤如下：⑴GRE基因序列的设计与合成，PRV gB基因的偏好性密码子优化；⑵构建重组穿梭载体pEGFP‑GRE‑GP5gB；⑶在Marc145及PK15细胞中转染重组质粒pEGFP‑GRE‑GP5gB，能表达目的蛋白，即得重组真核表达质粒pEGFP‑GRE‑GP5gB。本发明旨在构建可以预防针对多株PRRSV，同时可以预防PRV的重组真核质粒，为畜牧业两种疾病的防治提供一定的试验依据。
一种基因构建重组质粒 pegfp gre gp5gb 应用

[发明专利]一种法夫驹形氏酵母无细胞蛋白表达系统-CN202310676148.6在审
发明人：张建国;张裕;丛文杰 -专利权人：上海理工大学
申请日： 2023-06-08 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供一种法夫驹形氏酵母无细胞蛋白表达系统，属于生物合成技术领域，包括如下步骤：1)制备高活性的法夫驹形氏酵母细胞裂解液；2)构建质粒模板；3)将所述高活性的细胞裂解液与所述质粒模板混合，得到法夫驹形氏酵母无细胞蛋白表达系统(CFPS)；4)检测所述CFPS表达荧光蛋白(eGFP)。本发明利用醇氧化酶1启动子(PAOX1)或PAOX1突变序列在真核CFPS中指导表达；法夫驹形氏酵母SMD1163在细胞培养时添加1％～4％甲醇诱导，制备自身含有酵母RNA聚合酶II的细胞裂解液，使CFPS中不需要额外添加外源RNA聚合酶II，降低成本；质粒模板中的序列更适合真核CFPS的表达；高活性的法夫驹形氏酵母细胞裂解液的制备方法配合PAOX1或PAOX1突变序列，使真核CFPS中蛋白的表达量更高。
一种法夫驹形氏酵母细胞蛋白表达系统

[发明专利]适于真核表达的优化的兔源RabPON1基因以及重组表达方法-CN202011091292.6在审
发明人：龚晓洁;王璋 -专利权人：北京森根比亚生物工程技术有限公司
申请日： 2020-10-13 - 公布日： 2021-01-05 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明公开了适于真核表达的优化的兔源RabPON1基因以及重组表达方法。本发明通过对RabPON1、G2E6和G3C9基因进行密码子优化，得到适应于酵母表达系统的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1‑6所示的优化基因，进一步融合强信号分泌因子分泌到上清液中获得有生物学活性的重组蛋白本发明实现了哺乳动物来源的PON1在毕赤酵母中的表达，既克服了高等真核表达系统繁琐昂贵的缺陷，又避免了原核表达系统中蛋白修饰环节缺失所导致的失活问题，因此在毕赤酵母成功表达PON1活性蛋白为PON1的多重生物学功能得以应用和推广提供了基础本发明方法简单可行，成本投入方面低廉快捷，具有其他表达体系不可替代的优势。
适于表达优化 rabpon1 基因以及重组方法

[发明专利]双表达盒的表达载体及其制备方法与应用-CN200910076381.0无效
发明人：刘金华;刘芹防;马婧姣;蒲娟;傅光华;毕玉海 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2009-01-14 - 公布日： 2009-06-24 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种双表达盒的表达载体及其制备方法与应用。该表达载体是一种环状载体，包含原核复制起点、两个真核复制起点、筛选标记基因和两个外源基因表达盒；所述两个外源基因表达盒分别为外源基因表达盒1和外源基因表达盒2；所述外源基因表达盒1自上游至下游依次含有两个转录方向相同的启动子、连接片段1和多聚腺苷酸加尾信号，所述连接片段1含有EcoRV识别序列；所述外源基因表达盒2自上游至下游依次含有两个转录方向相同的启动子、连接片段2和多聚腺苷酸加尾信号，所述连接片段2含有StuI识别序列本发明的pDP-EX-vector含有两个外源基因表达盒、两个真核复制起点，可以在表达T抗原的细胞中大量增值，从而提高蛋白表达的水平，具有很好的应用前景。
表达载体及其制备方法应用

[发明专利]重组人抗体表达载体及其应用-CN200410010991.8无效
发明人：颜炜群;宿晓云 -专利权人：吉林圣元科技有限责任公司
申请日： 2004-07-14 - 公布日： 2006-01-18 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明涉及重组单克隆抗体，特别是涉及携带人抗体重链和轻链恒定区的用于表达人抗体的通用载体，其制备方法及其在真核表达系统中表达完整人抗体中的应用。
重组抗体表达载体及其应用

[发明专利]西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法及其应用-CN202211353618.7在审
发明人：周选围;胡广川;朱翔;袁青贤 -专利权人：西藏阿那达生物医药科技有限责任公司
申请日： 2022-11-01 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C07K14/375 文献下载
摘要：一种西藏灵芝免疫调节蛋白的制备方法及其应用，通过克隆得到西藏灵芝免疫调节蛋白基因后，通过基因重组构建重组真核表达载体pPIC9K::FIP‑gle‑His并线性化，再将重组真核表达载体转化到毕赤酵母GS115中形成毕赤酵母工程菌株，经发酵、表达和纯化得到西藏灵芝免疫调节蛋白FIP‑gle。本发明利用西藏灵芝免疫调节蛋白FIP‑gle基因序列，并通过酵母表达实现rFIP‑gle蛋白的系统制备，并将重组蛋白rFIP‑gle应用于影响巨噬细胞RAW 264.7分泌细胞因子TNF‑α。
西藏灵芝免疫调节蛋白制备方法及其应用

[发明专利]重组人HNP基因脂质体复合物、制备方法及用途-CN200810301844.4有效
发明人：魏于全;王永生;杨莉 -专利权人：四川大学
申请日： 2008-05-30 - 公布日： 2008-10-08 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：该真核表达载体含有并能表达人α－防御素成熟肽编码基因，还能制备成脂质体复合物。本发明真核表达载体及其脂质体复合物能在肿瘤内部表达并分泌具有杀伤活性的人α－防御素成熟肽，产生了明显的抗肿瘤作用，避开了人α－防御素成熟肽活性易受血清蛋白及Ca离子浓度影响的缺点，为肿瘤的基因治疗提供了新的选择
重组 hnp 基因脂质体复合物制备方法用途

[发明专利]溶解性多糖单加氧酶、其编码基因pclpmo176及其应用-CN201910931854.4有效
发明人：施鑫磊;王谦;周叶波;钱国英;尹尚军 -专利权人：浙江万里学院
申请日： 2019-09-29 - 公布日： 2022-11-15 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：一种溶解性多糖单加氧酶、其编码基因pclpmo176及其应用，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；其真核表达充足酶PcLPMO176为一种中温溶解性多糖单加氧酶，具有多种底物活性，其最适温度根据底物不同而呈现出本发明通过设计引物成功克隆得到序列，并在真核表达系统GS115中成功表达，经甲醇诱导表达，所得溶解性多糖单加氧酶对多种底物均有活性。该重组溶解性多糖单加氧酶具有良好的工业应用价值。
溶解性多糖单加氧酶编码基因 pclpmo176 及其应用