本发明涉及一种pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒、构建方法及其应用,包括:pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒,在pEGFP‑N1质粒中,含有CXXC4核苷酸序列,序列如SEQ ID NO:1所示;构建该质粒需要使用含有ECORI和BamHI酶切位点的CXXC4扩增引物,引物序列分别如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示;pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒的构建方法;pEGFP‑N1本发明的有益效果是:成功构建了带有CXXC4基因的重组基因表达质粒pEGFP‑N1‑CXXC4。使用带有ECORI和BamHI酶切位点的CXXC4扩增引物,可以高效、简便地构建带有CXXC4基因的pEGFP‑N1‑CXXC4重组表达质粒;基于pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒制备的靶向治疗生物制剂
本发明公开了一种双色荧光报告载体的构建方法和应用,一种双色荧光报告载体,其序列为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列,其构建方法步骤为:A.衍生质粒pEGFP-N1-Ampicillin的构建;B.衍生质粒pMD18-EGFP的构建;C.衍生质粒pMD18-EGFP-polyA的构建;D.衍生质粒pEGFP/EGFP的构建;E.目的质粒pEGFP/DsRed的最终构建;F.双色荧光报告载体pEGFP/DsRed的一种衍生双色荧光载体pEGFP/DsRed-HBx的制备。
本发明属于胚胎生物技术领域,涉及猪体细胞转基因克隆质粒pEGFP-N1-shRNA及其构建方法。本发明pEGFP-N1-shRNA质粒,它是通过将核苷酸序列如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.10所示的经过功能验证的靶向PRRSV基因shRNA表达盒插入载体pEGFP-N1本发明所构建pEGFP-N1-shRNA质粒在生产表达绿色荧光蛋白的转基因细胞、胚胎或动物时,也可表达靶向PRRSV基因的shRNA,从而为生产抗病转基因新品种打通技术路线。
本发明涉及一种HIV抑制剂筛选模型,该筛选模型由细胞模型I,细胞模型II,细胞模型III组成,其中,细胞模型I为重组质粒gp120/pEGFP‑N3与CD4/pDsRed‑N1共转染的HEK293T细胞;细胞模型II为重组质粒gp120/pDsRed‑N1与CXCR4/pEGFP‑N3共转染的HEK293T细胞;细胞模型III为重组质粒CD4/pEGFP‑N3与CXCR4/pDsRed‑N1共转染的HEK293T细胞;所述的重组质粒gp120/pDsRed‑N1和gp120/pEGFP‑N3中所插入的基因gp120的序列为SEQ ID NO.1所示;所述的重组质粒CXCR4/pEGFP‑N3和CXCR4/pDsRed‑N1中所插入的基因CD4的序列为SEQ ID NO.2所示;所述的重组质粒CXCR4/pEGFP‑N3和CXCR4/pDsRed‑N1中所插入的基因CXCR4的序列为SEQ ID NO.3所示。