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[发明专利]携带双筛选基因的真核表达载体构建及其应用-CN201110283158.0无效
发明人：董小岩;田文洪;吴小兵;董哲岳 -专利权人：北京五加和分子医学研究所有限公司
申请日： 2011-09-22 - 公布日： 2013-04-03 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明具体涉及一种携带dhfr和neo基因的真核表达载体pAAV2neo-dhfr，该表达载体主要由AAV2的ITR、neo基因表达框、dhfr基因表达框和外源基因表达框组成，其中外源基因表达框中含有多克隆位点MCS，用于表达外源基因的插入。使用时将外源基因插入其表达框的多克隆位点之间，获得外源基因的表达载体，转染表达细胞，多种策略筛选获得外源基因的稳定高表达细胞株。由于该载体携带AAV2的ITR序列，因此有利于外源基因稳定表达细胞株的获得。同时，该载体包含两种筛选基因，适用于多种表达细胞并缩短稳定高表达细胞株的筛选过程。本载体可高效地真核表达多种外源基因，为真核蛋白的表达提供了新的选择。
携带筛选基因表达载体构建及其应用

[发明专利]三元表达元件、包含该元件的真核表达载体及其用途-CN201210209703.6有效
发明人：勾蓝图;杨金亮;魏于全 -专利权人：四川大学
申请日： 2012-06-25 - 公布日： 2012-10-10 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程和蛋白质工程技术领域，具体地说，涉及一种能够实现目的基因、二氢叶酸还原酶（DHFR）基因和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因连锁表达的三元表达元件及含有该元件的真核表达载体，以及该载体的构建和用途本发明的三元真核表达载体可以用于方便地建立和筛选稳定高表达细胞株，大大节省了传统方法的时间和成本，具有良好的应用前景。
三元表达元件包含载体及其用途

[发明专利]重组人VEGF与bFGF真核表达载体、融合蛋白及其用途-CN200510051165.2无效
发明人：王雅梅;祁雅慧;邴国英 -专利权人：首都医科大学
申请日： 2005-03-02 - 公布日： 2005-08-17 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及重组真核表达载体，其中在真核表达载体上插入了人血管内皮细胞生长因子(VEGF)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因。
重组 vegf bfgf 表达载体融合蛋白及其用途

[发明专利]一种高效表达P53抑癌蛋白的T细胞、制备方法及应用-CN201711434089.2在审
发明人：王泰华;王欣;张刚;崔晓慧 -专利权人：东莞赛尔生物科技有限公司
申请日： 2017-12-26 - 公布日： 2018-05-22 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供一种高效表达P53抑癌蛋白的T细胞、制备方法及应用，本发明高效表达P53抑癌蛋白的T细胞，由p53真核表达载体转染T细胞得到；所述p53真核表达载体，是将p53基因连接至pcDNA 3.1载体中构建而成本发明建立高效表达p53的载体体系，以免疫T细胞为表达载体，可以高效表达不同亚型p53，更有效地发挥p53的抗肿瘤活性。本发明高效表达P53抑癌蛋白的T细胞可以用于制备用于治疗肿瘤的药物。
一种高效表达 p53 蛋白细胞制备方法应用

[发明专利]一种H1R高表达的重组HEK293细胞的构建方法-CN201210042367.0无效
发明人：贺浪冲;张涛;黄静;郭瑛 -专利权人：西安交通大学
申请日： 2012-02-23 - 公布日： 2012-07-25 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：一种H1R高表达的重组HEK293细胞的构建方法，利用真核表达载体pEGFP-N1构建全长H1R基因真核表达载体pEGFP-N1-H1R，进而以其转染HEK293细胞，利用G418筛选得到高表达全长H1R的基因的工程细胞系HEK293-H1R，并证实该细胞系可将全长H1R的表达提高2.58倍，H1R高表达的HEK293-H1R重组细胞应用于抗过敏药物筛选。
一种 h1r 表达重组 hek293 细胞构建方法

[发明专利]一种人绒毛膜促性腺激素β亚基的制备方法-CN200610117092.7无效
发明人：李大金 -专利权人：复旦大学附属妇产科医院
申请日： 2006-10-12 - 公布日： 2008-04-16 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：采用真核表达载体，构建含有6his纯化标签的和人绒毛膜促性腺激素β亚基的真核表达载体，用哺乳动物表达系统作为表达宿主，在体外表达、鉴定、纯化获得稳定、高效正确表达的人绒毛膜促性腺激素β亚基蛋白，本发明在有生物活性的
一种绒毛促性腺激素制备方法

[发明专利]用于重组蛋白表达的载体和方法-CN201180045047.4无效
发明人：吴晓云 -专利权人： ADV生物制剂公司
申请日： 2011-07-25 - 公布日： 2013-11-13 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一系列的真核表达载体，所述真核表达载体利用转录连读事件的减少来建立稳定且高产的重组蛋白表达用细胞系。所述载体包含一个以上的多腺苷酸化信号、或者一个或多个多腺苷酸化信号外加其它DNA片段，已知所述DNA片段增强转录终止来控制选择标记的表达水平，所述载体具有的配置可转录最低水平的全长双顺反子mRNA来表达选择标记，所述载体可用于建立高表达水平的稳定细胞系，而不需要药物选择或药物介导的基因扩增。
用于重组蛋白表达载体方法

[发明专利]非洲猪瘟病毒CD2v截短蛋白及在制备野毒和自然弱毒检测试剂盒中的应用-CN202110823057.1有效
发明人：金梅林;吕长杰;姜丽丽;赵亚;杨丽;赵丽;吴超;杨永;邹忠;孙小美 -专利权人：华中农业大学;武汉科前生物股份有限公司
申请日： 2021-07-21 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： C07K14/01 文献下载
摘要：通过比对发现原核表达的CD2v截短蛋白作为ELISA包被抗原不能检测到非洲猪瘟病毒感染的阳性血清，而真核表达的CD2v蛋白作为ELISA包被抗原可以检测非洲猪瘟病毒感染的阳性血清。以真核表达CD2v蛋白作为包被抗原制备的间接ELISA试剂盒，同时配合以非洲猪瘟病毒p54蛋白为包被抗原的间接ELISA试剂盒，可用于鉴别ASFV野毒株和自然弱毒株的感染，操作步骤简单，结果可靠。因此，以本发明提供的真核表达的截短蛋白制备的非洲猪瘟病毒间接ELISA检测试剂盒非常适合临床大样本的检测，适合大规模推广。
非洲猪瘟病毒 cd2v 蛋白制备自然检测试剂盒中的应用

[发明专利]一株含突变纳豆激酶重组基因的工程菌及其构建方法和应用-CN202110269600.8有效
发明人：刘宏生;李佳增;赵鹏燕;朱俊丰 -专利权人：辽宁大学
申请日： 2021-03-12 - 公布日： 2023-06-16 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：将NKt194突变片段按毕赤酵母X33密码子偏好性进行优化和合成得NKt2；构建PGAPZα‑A‑NKt2，将PGAPZα‑A‑NKt2转化毕赤酵母X33构建真核表达系统的纳豆激酶重组基因工程菌株；培养纳豆激酶重组基因工程菌株，诱导纳豆激酶表达。本发明成功构建一株突变纳豆激酶重组基因工程菌LNF012及在真核系统中表达，使原核生物的纳豆激酶基因在真核生物体系中成功表达，为今后纳豆激酶大规模的应用奠定了基础。
一株含突变激酶重组基因工程及其构建方法应用

[发明专利]一种重组人肝细胞生长因子rhHGF蛋白质的表达方法-CN02117822.4无效
发明人：牛勃;常冰梅;向前;解军;杨涛;阎占清;郭勇;胡晓年;杨琦;张悦红 -专利权人：四川汉龙高新技术开发有限公司
申请日： 2002-05-22 - 公布日： 2002-12-11 - 主分类号： C07K14/475 文献下载
摘要：本发明公开了一种用真核表达体系制备肝细胞生长因子(rhHGF)蛋白质的方法,通过克隆hHGF基因,构建真核表达质粒pRC/CMV－rhHGF,选用细胞株稳定、表达效率高的CHO和易成活、生活周期短、生长速度快的NRK作为宿主细胞表达出具有野生活性的rhHGF,与传统的原核表达体系相比,具有易于合成、rhHGF可有效分泌到培养液中、加工方式与天然蛋白相似、能发生折叠、形成二硫键、能发生糖基化、多聚化及前体加工和修饰等优点,不但成活工艺简单,而且保证了表达产物功能活性的存在,提供了一种用外源基因表达产生基因工程药物的方法。
一种重组肝细胞生长因子 rhhgf 蛋白质表达方法

[发明专利]检测方法-CN201980051265.5在审
发明人：安德鲁·巴内尔;埃丽卡·巴内尔;康毅明;伊丽莎白·沃兹勒;卡蒂·坎贝尔 -专利权人：基因复制有限公司
申请日： 2019-05-31 - 公布日： 2021-03-26 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本文提供了用于检测结直肠肿瘤和结肠癌的材料和方法，其基于受试者(例如患者)的粪便样品中存在的真核核酸中的粪便来源的真核RNA生物标志物的表达水平。所述方法可用于检测高危腺瘤和结直肠肿瘤分子亚型。
检测方法

[发明专利]在哺乳动物细胞中高效表达猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的方法-CN201210018722.0有效
发明人：李龙;于涟;方立 -专利权人：杭州贝尔塔生物技术有限公司
申请日： 2012-01-20 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种在哺乳动物细胞中高效表达猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的方法。该方法通过抑制猪圆环病毒2型核衣壳蛋白的泛化作用(Ubiquitination)，增强其稳定性，从而提高病毒蛋白在哺乳动物细胞中表达水平。方法的步骤为：1）猪圆环病毒2型SX04株全基因组序列的克隆；2）含有猪圆环病毒2型（PCV2）核衣壳蛋白基因的真核表达质粒的构建；3）将上述质粒转染猪肾细胞PK15，转染后24小时，在细胞培养液中加入MG132；4）继续培养48小时后，收集细胞，免疫印迹检测表达蛋白。相对于普通的真核表达方法，该方法可有效稳定真核细胞中的PCV2核衣壳蛋白。转染后72小时的蛋白免疫印迹检测显示，本专利使用的方法，可最高提高PCV2核衣壳蛋白的表达量在20倍左右。
哺乳动物细胞高效表达圆环病毒型核衣壳蛋白方法

[发明专利]一种鸡A－FABP抗血清制备及其在特异性鉴定中的应用方法-CN200810063846.4无效
发明人：李辉;石慧;王启贵 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2008-01-11 - 公布日： 2008-08-13 - 主分类号： G01N33/531 文献下载
摘要：本发明提供了一种鸡A－FABP抗血清制备及特异性鉴定的应用方法，根据鸡A－FABP基因序列扩增其编码区序列，并将该序列分别构建到原核表达质粒pGEX－4T－1和真核表达质粒pcDNA3中，得到鸡A－FABP基因的原核表达质粒pGEX－4T－1/A－FABP和真核表达质粒pcDNA3/A－FABP。将原核表达质粒pGEX－4T－1/A－FABP转入到大肠杆菌感受态细胞BL 21(DE3)中，利用IPTG诱导使其表达鸡A－FABP融合蛋白，融合蛋白经纯化后免疫家兔制备抗血清。利用本发明制备的抗血清进行抗体的特异性检测分析，结果表明本发明所制备的抗血清可以特异性的识别小鼠肝脏中表达的鸡A－FABP。进而利用本发明制备的抗血清检测了鸡9种组织中A－FABP的表达情况，结果表明其仅在脂肪组织中表达。
一种 fabp 血清制备及其特异性鉴定中的应用方法

[发明专利]一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法-CN201910012271.1有效
发明人：林重超;王天云;郭潇;赵春澎;倪天军;林艳;王燕芳 -专利权人：新乡医学院
申请日： 2019-01-07 - 公布日： 2022-09-23 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法，属于基因工程技术领域。本发明中的方法应用CHO细胞内源miRNAs与3′‑UTR转录区互补结合来对筛选标记基因表达进行负性调节，进而提高目的基因的表达量。将miRNAs与3′‑UTR转录区克隆到筛选标记基因的下游，构建真核表达载体；然后将目的基因克隆到真核表达载体获得重组表达载体，然后将其转染细胞，获得CHO细胞表达系统，实现目的基因的高效表达。本发明的CHO细胞表达系统，可以显著提高目的基因在CHO细胞中的表达水平，实现目的蛋白在CHO细胞的高产量稳定表达。
一种提高 cho 细胞重组蛋白表达水平方法及其应用载体系统制备

[发明专利]一种高效新城疫DNA疫苗的分子佐剂及其制备方法和应用-CN201510547261.X在审
发明人：任涛;李艳玲;康银峰;谢鹏 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2015-08-31 - 公布日： 2016-01-20 - 主分类号： A61K39/39 文献下载
摘要：所述的高效新城疫DNA疫苗的分子佐剂为将鸡白细胞介素12的构建到真核表达载体pCAGGS中，获得重组鸡白细胞介素12的真核表达载体pCAGGS-IL12。本发明成功地构建了重组鸡白细胞介素12的单链双亚基真核表达质粒，不仅可保证P40、P35两亚基以1∶1比率表达，而且柔性氨基酸接头可使两个亚基充分延展、正确折叠，从而获得最大的生物学活性。
一种高效新城 dna 疫苗分子佐剂及其制备方法应用