本发明公开了一种桑树类胡萝卜素裂解双加氧酶基因及其原核表达，该基因为首次分离得到桑树类胡萝卜素裂解双加氧酶基因，对研究类胡萝卜素裂解双加氧酶基因的功能以及裂解产物奠定基础。本发明所提供的桑树类胡萝卜素裂解双加氧酶基因如SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列或者添加本发明提供的桑树类胡萝卜素裂解双加氧酶基因的原核表达为首次通过原核表达的方式成功得到桑树类胡萝卜素裂解双加氧酶蛋白的方法。
本发明涉及基因重组和蛋白质原核表达领域，具体说是一种大肠杆菌硫氧还蛋白TrxA和小泛素样修饰蛋白SUMO融合形成双促溶表达标签序列及其在原核表达载体中的应用。所述的SUMO和TrxA双促溶表达标签，具有序列表SEQ ID NO：1中碱基序列。将该序列应用于原核表达载体的外源蛋白编码基因上游，作为促溶标签与外源基因同时融合表达，可以显著促进所表达的外源蛋白的可溶性，提高了可溶性外源蛋白的回收效率。
本发明公开了一种海藻酸裂解酶SHA‑I基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示；本发明构建了海藻酸裂解酶基因SHA‑I的原核表达载体，该原核表达载体能够在较短时间内获得表达产物海藻酸裂解酶SHA‑I，且具有广泛的底物特异性，既能利用PolyM也能利用PolyG为底物，酶活达到13U/mg，是一种具有广泛应用前景的双功能酶，本发明原核表达载体和整体表达系统容易操作，便于工业化生产。
本发明公开了一种色氨酸脱羧酶基因原核表达载体，由如下方法构建而成：(1)以pEGX‑4T‑1为出发质粒，将pEGX‑4T‑1利用pflmⅠ和btgⅠ双酶切之后连入长度为100bp的人造链，构建得到质粒pEGX‑4T‑J；(2)将编码水稻色氨酸脱羧酶的基因进行密码子优化，优化后的水稻色氨酸脱羧酶的编码基因序列如SEQ ID NO.1所示；(3)采用SpeⅠ和Bsc91Ⅰ对质粒pEGX‑4T‑J进行双酶切处理，通过DNA连接酶将SEQ ID NO.1所示的核苷酸片段连入双酶切后的质粒pEGX‑4T‑J上，即构建得到色氨酸脱羧酶基因原核表达载体。采用本发明构建的色氨酸脱羧酶基因原核表达载体可以显著提高色氨酸脱羧酶的表达量。
