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[发明专利]一种改进的PB转座子系统及其用途-CN201811392822.3在审
发明人：刘韬;刘辉;金华君;王超;何周;何江川;吴碧寒;刘天怡;钱其军 -专利权人：上海细胞治疗集团有限公司;上海细胞治疗研究院
申请日： 2018-11-21 - 公布日： 2020-05-29 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：具体而言，本发明提供一种核酸构建体，其依次含有控制PiggyBac转座酶表达的启动子、PiggyBac转座酶编码序列、PiggyBac转座子5’末端重复序列、任选的polyA加尾信号序列1、多克隆插入位点、polyA加尾信号序列2和PiggyBac转座子3’末端重复序列。
一种改进 pb 座子系统及其用途

[发明专利]一种高效安全的转座子整合系统及其用途-CN201510638974.7有效
发明人：钱其军;金华君;李林芳;刘韬;左明辉;吴红平;吴孟超 -专利权人：上海细胞治疗研究院;上海细胞治疗集团有限公司
申请日： 2015-09-30 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：具体地，所述的核酸构建体，其依次包含如下元件：转座子5’末端重复序列、多克隆插入位点、polyA加尾信号序列、转座子3’末端重复序列、转座酶编码序列以及控制该转座酶表达的启动子；其中，所述多克隆插入位点用于可操作地插入外源基因编码序列以及可选的控制外源基因表达的启动子；所述polyA加尾信号序列正反向均具有polyA加尾信号功能；所述转座酶的表达框的方向与外源基因表达框的方向相反。
一种高效安全座子整合系统及其用途

[发明专利]一种基于加尾引物设计的Sanger测序方法-CN202210358213.6在审
发明人：陈志宏;吴水英;陈琰 -专利权人：厦门飞朔生物技术有限公司
申请日： 2022-04-06 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明涉及基因测序的技术领域，特别是一种基于加尾引物设计的Sanger测序方法，包括如下步骤：(1)根据样本DNA选择特异性引物序列，之后在特异性引物序列的5’端加上通用引物序列得到加尾引物序列，根据加尾引物序列合成加尾引物；(2)使用加尾引物配制PCR扩增反应液，加入样本DNA，执行PCR扩增程序，得到PCR扩增产物；(3)PCR扩增产物进行纯化；(4)选择通用引物作为测序引物,对纯化的PCR扩增产物进行循环测序反应；(5)循环测序反应产物经过纯化、变性、上机测序得到样本DNA的序列，本发明通过通用序列和特异性序列引物的结合不仅可以节省Sanger测序的工作量，也可以降低引物加错的可能性。
一种基于引物设计 sanger 方法

[发明专利]用于构建流感病毒的反向遗传系统的载体及应用-CN200810119705.X无效
发明人：刘金华;刘芹防;马广鹏;蒲娟;王帅 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2008-09-05 - 公布日： 2009-01-14 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：所述载体为环状载体，包含原核复制起点、筛选标记基因、多聚腺苷酸加尾信号和两个转录方向相同的启动子，所述多聚腺苷酸加尾信号位于所述两个转录方向相反的启动子的下游，其中，所述两个转录方向相同的的启动子和所述多聚腺苷酸加尾信号之间含有pol I元件，所述pol I元件自上游至下游依次为RNA聚合酶I启动子、连接片段和RNA聚合酶I终止子，所述连接片段含有如下1)或2)的序列：1)GGGGAGCGAAAGCAGG；2)GGTTATTAGTAGAAACAA
用于构建流感病毒反向遗传系统载体应用

[发明专利]针对3’端带有A重复序列的情况下获得完整3’末端序列的3’RACE方法-CN201710100037.5有效
发明人：潘铖烺 -专利权人：厦门大学
申请日： 2017-02-23 - 公布日： 2019-07-23 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种针对3’端带有A重复序列的情况下获得完整3’末端序列的3’RACE方法，包括如下步骤：1)利用末端转移酶对mRNA进行加尾，增加一段接头序列；以dCTP或dGTP对mRNA进行加尾,增加16‑22bp单碱基重复序列；2)第一链cDNA的合成：以带有oligodG或oligodC的锚定引物作为接头序列，对加尾后的mRNA进行反转录；3)进行3’RACE扩增：以带接头序列的cDNA为模板，根据RACE引物设计原则设计模板内部特异性引物GSP2和其对应的巢式引物NGSP2为扩增的正向引物，同时设计接头序列的互补序列(AUAP)为反向扩增引物，对带接头的cDNA序列进行3’RACE。本发明可解决因序列的特殊结构(带有A重复序列)所导致的3’RACE无法获得完整末端序列的问题。
针对带有重复序列情况获得完整末端 race 方法

[发明专利]质粒型单纯疱疹病毒系列载体的构建和用途-CN98120032.X无效
发明人：吴小兵;董小岩;蒋立新;伍志坚;侯云德 -专利权人：病毒基因工程国家重点实验室
申请日： 1998-09-24 - 公布日： 2000-03-29 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：这些载体分别含有以下共同元件HSV－1复制起点oriS序列及IE68启动子、lacZ基因、SV40polyA、HSV－1包装信号“a”序列和大肠杆菌质粒骨架。首先构建了HSV－1质粒型载体pHSVIE68,其中在IE68启动子的下游带有可供外源基因插入的HindⅢ,SalⅠ,XbaⅠ,BamHⅠ等克隆位点,其后没有polyA加尾信号。该载体可用于装载本身带有加尾信号的基因;在此基础上,我们又构建了含有SV40ployA信号的通用型HSV－1扩增子载体pHSVIE68pA,用于装载无加尾信号的cDNA;还构建了可装载外源基因的质粒型HSV
质粒单纯疱疹病毒系列载体构建用途

[发明专利]可诱导性组织特异性表达载体及其用途-CN201110077001.2有效
发明人：马端;张进;王慧君;罗欣 -专利权人：复旦大学
申请日： 2011-03-29 - 公布日： 2012-10-10 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本可诱导性组织特异性表达载体，主要包括以下结构：EF1α启动子，EGFP荧光标记基因，两端连有同向LoxP序列的BGHpolyA加尾转录终止序列和内部引入酶切位点的内含子序列；所述载体为pEFGLPAL-MIR，其使用EF1alpha通用启动子驱动基因表达，EGFP荧光标记基因用于指示基因的表达，两段连有同向LoxP71和LoxP66的BDHpolyA加尾转录终止信号，可被Cre酶诱导；在所述的终止信号其后的是一段内含子序列
诱导性组织特异性表达载体及其用途

[发明专利]用于通过核酸聚合酶对衬底多核苷酸进行大小受控的同聚物加尾的方法和组合物-CN201810004450.6有效
发明人：弗拉基米尔·马卡罗夫;劳里·库里哈拉 -专利权人：斯威夫特生物科学公司
申请日： 2013-03-13 - 公布日： 2022-01-11 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明涉及用于通过核酸聚合酶对衬底多核苷酸进行大小受控的同聚物加尾的方法和组合物。更具体而言，本发明涉及用于将具有特定长度的尾部添加至衬底多核苷酸的方法和组合物。本发明还涵盖用于将所加尾的衬底固定至固体支持物的方法和组合物。本公开预期衰减子分子是与添加至衬底多核苷酸的尾部序列缔合，并且控制尾部序列至所述衬底多核苷酸的3'末端的所述添加的任何生物分子。添加至所述衬底多核苷酸的序列本文称为尾部序列，或简称尾部，并且将核苷酸添加至衬底多核苷酸的过程本文称为加尾。
用于通过核酸聚合衬底多核苷酸进行大小受控同聚物方法组合

[发明专利]一种基于FRET的PCR均相检测系统及其应用-CN201810580151.7在审
发明人：王卫东;钟京;毛赟赟;李京励 -专利权人：王卫东
申请日： 2018-06-07 - 公布日： 2018-10-30 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明提供一种基于FRET的PCR均相检测系统及其应用，该PCR均相检测系，包括至少一个荧光或淬灭标记的连接标签序列的加尾引物，即可以启动DNA合成的引物；与标签序列互补的淬灭或荧光标记的寡核苷酸序列，本发明通过荧光定量PCR仪器可以及时观察信号，并在反应结束时立刻得到结果。
标签序列检测系统反向扩增引物寡核苷酸序列荧光定量PCR 淬灭标记观察信号加尾引物荧光标记荧光淬灭引物应用检测

[发明专利]确定病毒RNA分子3’末端序列的方法-CN201210076653.9无效
发明人：李治;孙燕;王立飞;孙书洪 -专利权人：陕西师范大学
申请日： 2012-03-21 - 公布日： 2012-08-01 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：一种确定病毒RNA分子3’末端序列的方法，包括提取病毒RNA、加尾病毒RNA的纯化、加尾病毒RNA的逆转录反应、病毒逆转录产物的聚合酶链式反应扩增步骤。病毒RNA的末端转移反应本发明通过末端转移反应加尾后，可利用逆转录反应准确地确定病毒RNA分子的3’末端序列，方便快捷。同时，本发明也可以应用于其他3’末端不具有PolyA尾结构的RNA分子的3’末端序列的确定。
确定病毒 rna 分子末端序列方法

[发明专利]分裂循环和TAPE扩增-CN201680077480.9有效
发明人： N·埃雷迪亚;D·玛尔 -专利权人：生物辐射实验室股份有限公司
申请日： 2016-12-28 - 公布日： 2022-07-22 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本文描述了用于定量检测核酸样品中的序列的方法和组合物。该方法通常涉及将核酸样品分配到离散反应室中的大量混合物分区中。另一方面，在标记扩增子引物延伸(TAPE)反应中分析分配的样品。在TAPE反应中，使用一对5＇‑加尾扩增引物，一个5＇‑加尾正向引物和一个5＇‑加尾反向引物扩增靶序列。在另一方面，本发明提供了对核酸样品中的野生型和突变型靶核酸片段的频率进行定量的方法。
分裂循环 tape 扩增

[发明专利]一种免筛选原/真核双表达载体及其构建与应用-CN201710037821.6在审
发明人：马跃 -专利权人：西南大学
申请日： 2017-01-19 - 公布日： 2018-07-27 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明载体在Kozak序列与真核加尾信号序列之间含有一个高效自杀基因表达盒，因此采用本发明提供的PCR重组克隆技术克隆目的基因时，目的基因将插入本发明提供的原/真核双表达载体的Kozak序列与真核加尾信号序列之间并替换原有的高效自杀基因表达盒
真核目的基因表达载体加尾信号序列原核表达重组载体自杀基因表达盒构建克隆真核表达调控元件筛选应用生物技术领域重组克隆技术重组载体克隆调控元件经济成本时间成本真核表达重组克隆自动筛选连接酶内切酶原有的替换兼容节约

[发明专利]用于通过核酸聚合酶对衬底多核苷酸进行大小受控的同聚物加尾的方法和组合物-CN201380014044.3有效
发明人：弗拉基米尔·马卡罗夫;劳里·库里哈拉 -专利权人：斯威夫特生物科学公司
申请日： 2013-03-13 - 公布日： 2018-01-30 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明还涵盖用于将所加尾的衬底固定至固体支持物的方法和组合物。本公开预期衰减子分子是与添加至衬底多核苷酸的尾部序列缔合，并且控制尾部序列至所述衬底多核苷酸的3'末端的所述添加的任何生物分子。添加至所述衬底多核苷酸的序列本文称为尾部序列，或简称尾部，并且将核苷酸添加至衬底多核苷酸的过程本文称为加尾。
用于通过核酸聚合衬底多核苷酸进行大小受控同聚物方法组合

[发明专利]一种检测DNA中的单链断裂的方法-CN201910837092.1有效
发明人：菲利普·卡帕诺夫;曹慧芬;洛雷娜·萨拉萨尔-加西亚;高帆;徐冬旸;蔡烨;韩雪儿;王芳;唐露 -专利权人：华侨大学
申请日： 2019-09-05 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测DNA中的单链断裂的方法，包括如下步骤：1)对待测DNA进行片段化，由此产生的片段的3’末端不能被加尾；2)对片段化的待测DNA的3’末端进行第一次加尾；3)对第一次加尾后的样品通过以下步骤捕获和识别全基因组中DNA单链断裂(single strand breaks,SSBs)的位置：首先，使用嵌合5’‑DNA‑RNA‑3’引物对加尾后的片段进行线性扩增；其次，对扩增产物的3’末端进行第二次加尾；最后，目标产物通过包含接头序列的寡核苷酸进行
一种检测 dna 中的断裂方法

[发明专利]改造合成的苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因Cry2A-CN02139000.2有效
发明人：林拥军;张启发 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2002-09-04 - 公布日： 2004-03-10 - 主分类号： C12N15/32 文献下载
摘要：一种改造合成的苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白DNA序列Cry2A。其特征在于：设计并合成了苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白DNA序列Cry2A；与原始Cry2A DNA序列比较，该DNA序列编码蛋白的氨基酸组成不变，植物偏爱性密码子的使用频率较高，消除了原始DNA序列中的富含AT序列和存在的反向重复序列以及不明确的真核DNA序列内含子序列，C+G含量为59.04％，与原始DNA序列的同源性为69.45％。在编码序列的5’端添加有引导序列和3’端添加加尾识别信号序列。本发明的DNA序列可在植物细胞种表达，并可应用于转基因抗虫植物的育种上。
改造合成苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因 cry2a

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