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[发明专利]一种从人脐带血CD34⁺细胞扩增巨核祖细胞的方法-CN200910070479.5有效
发明人：韩忠朝;刘蒙;杨少光 -专利权人：中国医学科学院血液学研究所
申请日： 2009-09-17 - 公布日： 2010-02-17 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种从人脐带血CD34⁺细胞扩增巨核祖细胞的方法，我们将磁珠分选的脐带血CD34⁺造血祖细胞接种于照射的人骨髓间充质干细胞上，在含有重组人血小板生成素(rhTPO)的无血清培养基中培养7天，通过细胞计数、流式细胞表型检测和巨核细胞集落形成实验(CFU-MK assay)分析扩增巨核祖细胞的效果。采用本发明的方法扩增巨核祖细胞，与现有方法相比，培养条件更接近体内天然的骨髓造血微环境，扩增巨核祖细胞的数量更多，而且间充质干细胞所分泌的细胞因子和添加的rhTPO均符合临床应用的标准。因此，本发明为巨核祖细胞体外扩增提供了一条新途径。
一种脐带血 cd34 sup 细胞扩增巨核祖方法

[发明专利]一种快速高效体外扩增人间充质干细胞的方法及应用-CN202010846476.2有效
发明人：肖建辉;罗熠;钟建江;余昌胤 -专利权人：遵义医科大学附属医院
申请日： 2020-08-21 - 公布日： 2022-04-08 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速高效体外扩增人间充质干细胞的方法，该方法将人外周血中的免疫细胞与人间充质干细胞以1:1‑400:1的细胞数量比例进行共培养，能极显著增强人间充质干细胞的增殖能力，其体外扩增数量是常用方法的十倍以上，且扩增后的细胞仍维持干细胞的生物学特征，并有更强的自我更新能力和多向分化潜能。来自不同年龄人群的人外周血免疫细胞对人间充质干细胞的促增殖效应无统计学差异，不受年龄限制。受试者用自体外周血中的免疫细胞来扩增人间充质干细胞，能规避免疫排斥风险。采用本发明扩增的细胞移植治疗疾病模型，无免疫排斥反应。本发明有效解决了干细胞临床应用数量不足、质量欠佳、疗效受限的问题，有巨大的应用前景。
一种快速高效体外扩增人间干细胞方法应用

[发明专利]用于单细胞固定-隔离并原位核酸扩增的微流控芯片及其应用-CN201911328152.3有效
发明人：秦玉岭;吴丽;冀海伟;周晓波;刘金霞 -专利权人：南通大学
申请日： 2019-12-20 - 公布日： 2023-06-20 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明提供一种用于单细胞固定‑隔离并原位核酸扩增的微流控芯片及其应用，包括进样口、细胞阵列室和出样口，所述细胞阵列室包括若干个细胞阵列室单元，所述细胞阵列室单元包括单元进口、单元出口、核酸扩增反应室和导流管道，所述核酸扩增反应室的入口为细胞固定卡口；所述导流管道的两端分别连通细胞固定卡口与单元进口之间的通道，以及核酸扩增反应室出口与单元出口之间的通道。本发明能实现细胞的快速固定。待细胞固定后，通过油水不互溶形成油包水隔离单元，每个单元只含有一个细胞和用于细胞裂解和核酸扩增的试剂，从而实现单细胞的基因等信息的分析。可以解决现有技术中无法做到的集单细胞固定和原位分析于一体的问题。
用于单细胞固定隔离原位核酸扩增微流控芯片及其应用

[发明专利]一种γδT细胞的制备和扩增方法以及应用-CN202011411314.2在审
发明人：朱焕章;姜正涛;梁玥;梁卉彤 -专利权人：复旦大学
申请日： 2020-12-03 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明属于细胞生物学技术领域，涉及外周血来源γδT细胞的分离及扩增方法。本发明提供了一种分离、扩增和修饰体外扩增γδT细胞的体外方法，包括：获取或者分离γδT细胞；和/或在存在含有唑来膦酸、人重组白细胞介素2(IL‑2)和人重组白细胞介素7(IL‑7)的情况下培养介质中扩增所述分离的γδT细胞。本发明还提供了使用嵌合抗原受体修饰γδT细胞，及其在用于制备抗肿瘤及抗艾滋病制品中的应用。
一种细胞制备扩增方法以及应用

[发明专利]一种细胞因子诱导脐带血自然杀伤细胞的高效扩增方法-CN201810815205.3在审
发明人：白利明;聂苏秦;朱艳丽;张博;车小红 -专利权人：陕西九州细胞基因工程有限公司
申请日： 2018-07-24 - 公布日： 2018-11-27 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：一种细胞因子诱导脐带血自然杀伤细胞的高效扩增方法，包括以下步骤：一、试剂的准备；二、自体血浆的制备；三、单个核细胞的制备，淋巴细胞采用样本密度分离液密度梯度离心法进行分离。四、自然杀伤细胞(Nature killer cell，NK)的扩增培养，采用细胞因子诱导法。本发明的NK细胞扩增方法在分离过程中加入了红细胞沉降液，去除红细胞干净，临床应用降低患者产生排异反应，扩增效率高，所得Nk细胞的纯度高，且无需滋养层细胞，操作简单，通用性好，所用试剂不含动物源成分，安全性好
细胞因子诱导自然杀伤细胞扩增脐带血制备淋巴细胞密度梯度离心法红细胞红细胞沉降液单个核细胞密度分离液滋养层细胞分离过程扩增培养扩增效率临床应用自体血浆动物源去除样本

[发明专利]一种脐带造血干细胞体外扩增培养体系和脐带造血干细胞体外扩增方法-CN201811069944.9在审
发明人：李陶 -专利权人：李陶;吴春风
申请日： 2018-09-13 - 公布日： 2020-03-20 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明属于干细胞技术领域，尤其涉及一种脐带造血干细胞体外扩增培养体系和脐带造血干细胞体外扩增方法。本发明提供了一种脐带造血干细胞体外扩增培养体系，包括：G1/S‑特异性周期蛋白‑D1和骨形态发生蛋白4。结果表明，在脐带造血干细胞体外扩增培养体系添加G1/S‑特异性周期蛋白‑D1和骨形态发生蛋白4可明显提升脐带造血干细胞的体外扩增效率并维持其干性。
一种脐带造血干细胞体外扩增培养体系方法

[发明专利]用于扩增培养肾元祖细胞的培养基、扩增培养肾元祖细胞的方法以及肾脏类器官的制造方法-CN202280009274.X在审
发明人：长船健二;荒冈利和;小林义史;两坂诚;辻本启 -专利权人：国立大学法人京都大学;雷杰耐佛诺有限公司
申请日： 2022-01-11 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供一种包含GSK‑3β抑制剂、ROCK抑制剂、以及从FGF9和FGF20组成的群中选择的至少1种成纤维细胞生长因子的用于扩增培养肾元祖细胞的培养基。此外，提供一种使用所述培养基来扩增培养肾元祖细胞的方法。此外，提供一种包括通过扩增培养所述肾元祖细胞的方法，来扩增培养肾元祖细胞的工序，和使所述扩增培养的肾元祖细胞分化为肾脏类器官的工序的肾脏类器官的制造方法。
用于扩增培养元祖细胞培养基方法以及肾脏器官制造

[发明专利]高效离体人造血干细胞扩增培养液配方-CN201410066574.9有效
发明人：蒋永平 -专利权人：苏州方舟基因药业有限公司
申请日： 2014-02-26 - 公布日： 2018-06-12 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明涉及高效离体人造血干细胞扩增培养液配方。揭示了一种离体扩增造血干细胞的培养基和培养方法，通过所述培养基和培养方法可使造血干细胞在保持原来干性特征的基础上进行有效和大量的扩增，大大提高造血干细胞的体外扩增效率。
造血干细胞扩增人造血干细胞培养液配方培养基离体离体扩增体外扩增干性

[发明专利]一种离体人造血干细胞扩增培养液配方-CN201410066590.8有效
发明人：蒋永平;任志华;沈斌;蒋文宏;马鈺波;戴卫 -专利权人：苏州方舟基因药业有限公司
申请日： 2014-02-26 - 公布日： 2018-07-10 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明涉及一种离体人造血干细胞扩增培养液配方。揭示了一种离体扩增造血干细胞的培养基和培养方法，通过所述培养基和培养方法可使造血干细胞在保持原来干性特征的基础上进行有效和大量的扩增，大大提高造血干细胞的体外扩增效率。
造血干细胞扩增人造血干细胞培养液配方培养基离体离体扩增体外扩增干性

[发明专利]一种用于DNA提取的微流控芯片及其检测方法-CN201811211891.X在审
发明人：聂泳忠;黄思敏;余桂荣;何兴理 -专利权人：西人马（厦门）科技有限公司
申请日： 2018-10-17 - 公布日： 2019-04-05 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明涉及核酸检测技术领域，具体涉及一种用于DNA提取的微流控芯片及其检测方法，包括：细胞破碎单元、核酸提取单元和LAMP扩增单元；其中，所述细胞破碎单元，用于破碎待检测样品溶液中的细胞并将破碎后得到的细胞液输送至核酸提取单元；所述核酸提取单元，从所述细胞液中提取核酸，分离所述核酸和提取核酸后剩余的细胞残液，并将所述核酸输送至LAMP扩增单元；所述LAMP扩增单元，供所述核酸进行LAMP扩增以及供核酸扩增后的产物进行显色反应，本发明的微流控芯片可以依次完成细胞破碎、核酸提取和扩增显色的过程，不需要借助大型仪器，方便携带，操作简单，效率高，方便于实验室以外的现场实施快速检测。
核酸提取单元微流控芯片细胞破碎提取核酸细胞液核酸破碎核酸检测技术待检测样品细胞大型仪器核酸扩增核酸输送核酸提取快速检测显色反应检测残液扩增显色携带

[实用新型]一种用于DNA提取的微流控芯片-CN201821685558.8有效
发明人：聂泳忠;黄思敏;余桂荣;何兴理 -专利权人：西人马（厦门）科技有限公司
申请日： 2018-10-17 - 公布日： 2019-11-05 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本实用新型涉及核酸检测技术领域，具体涉及一种用于DNA提取的微流控芯片，包括：细胞破碎单元、核酸提取单元和LAMP扩增单元；其中，所述细胞破碎单元，用于破碎待检测样品溶液中的细胞并将破碎后得到的细胞液输送至核酸提取单元；所述核酸提取单元，从所述细胞液中提取核酸，分离所述核酸和提取核酸后剩余的细胞残液，并将所述核酸输送至LAMP扩增单元；所述LAMP扩增单元，供所述核酸进行LAMP扩增以及供核酸扩增后的产物进行显色反应，本实用新型的微流控芯片可以依次完成细胞破碎、核酸提取和扩增显色的过程，不需要借助大型仪器，方便携带，操作简单，效率高，方便于实验室以外的现场实施快速检测。
核酸提取单元微流控芯片细胞破碎本实用新型提取核酸细胞液核酸破碎核酸检测技术待检测样品细胞大型仪器核酸扩增核酸输送核酸提取快速检测显色反应残液扩增显色携带

[发明专利]一种同步检测5个红细胞血型系统12个抗原的基因分型方法及试剂-CN201811419215.1在审
发明人：朱发明;许先国;应燕玲;洪小珍;陈舒;马开荣;何吉 -专利权人：浙江省血液中心
申请日： 2018-11-26 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： C12Q1/6876 文献下载
摘要：快速、准确的一种同步检测5个红细胞血型系统12个抗原的基因分型方法，包括步骤：(1)制备基因分型样本的人基因组DNA；(2)提供扩增引物，用聚合酶链反应同步扩增所述基因组DNA中5个血型系统12个抗原对应的基因序列；(3)将步骤(2)得到的扩增产物作双酶切纯化；(4)提供测序引物，将步骤(3)所得纯化产物分别作测序PCR反应；(5)将步骤(4)所得测序反应产物作醋酸钠‑乙醇沉淀法纯化，毛细管电泳测序；(6)将步骤(5)所得序列经软件分析，确定其血型抗原基因型；所述扩增引物和测序引物为序列号1‑14的，所述方法所用试剂具有所述扩增引物和测序引物。本发明用于种同步检测5个红细胞血型系统12个抗原的基因分型。
抗原红细胞血型测序引物基因分型扩增引物同步检测毛细管电泳测序聚合酶链反应人基因组DNA 乙醇沉淀法基因组DNA 测序反应纯化产物基因序列扩增产物软件分析同步扩增血型抗原血型系统制备基因测序PCR 醋酸钠基因型双酶切分型样本

[发明专利]利用酵母同源重组系统构建的香蕉枯萎菌基因敲除突变体回补载体及其应用-CN202310150744.0在审
发明人：张欣;彭军;曾凡云;王艳玮;漆艳香;谢培兰;谢艺贤 -专利权人：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
申请日： 2023-02-22 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明公开一种利用酵母同源重组系统构建的香蕉枯萎菌基因敲除突变体回补载体及其应用，所述回补载体包括以下构建步骤：(1)扩增PgpdA启动子序列；(2)扩增eGFP序列；(3)融合扩增产物；(4)利用酵母同源重组系统构建中间载体；(5)利用酵母同源重组系统构建回补载体：扩增HYG或NEO抗性基因表达框，将扩增产物与线性化的中间载体共转化进入酵母细胞，构建重组质粒，得到回补载体。本发明回补载体中导入PgpdA启动子，明显提高基因表达量，回补菌株能够表达更加强烈的eGFP荧光信号，更加有利于亚细胞定位观察。
利用酵母同源重组系统构建香蕉枯萎基因突变体载体及其应用

[实用新型]自动造血干细胞培养系统-CN200520043614.4无效
发明人：高春平 -专利权人：高春平
申请日： 2005-07-21 - 公布日： 2007-07-18 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种生物细胞培养系统，尤其涉及一种人体干细胞或/和人体造血干细胞体外扩增培养装置，更具体地说，这是一种干细胞和造血干细胞自动培养和扩增的装置，在该装置内，各种不同分化程度的干细胞和造血干细胞被同步培养，自动调节和控制培养媒介中的营养成份和生长因子保持在适当的水平，自动排泄培养中代谢产物，这种在体外同步培养多种类型干细胞和造血干细胞的装置和方法，可以应用于临床生物细胞治疗和造血干细胞移植术。
自动造血干细胞培养系统

[发明专利]亚健康治疗用自体造血干细胞技术-CN201210035300.4无效
发明人：孙勇 -专利权人：孙勇
申请日： 2012-02-16 - 公布日： 2013-08-21 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：一种利用亚健康者自体的血源性细胞分离纯化并培养出能够用于亚健康治疗的干细胞，涉及基础医学、健康保健医学领域。从亚健康者体内取出血源性细胞分离纯化干细胞，并在特定的培养体系中进行扩增培养，在干细胞总数达到一定数目后，通过静脉输注，治疗亚健康者。造血干细胞能够重建机体的免疫系统功能，能用于亚健康者自身的康复。本培养扩增体系可以迅速扩增干细胞并保持干细胞特性，移植时无需配型，用于亚健康者的保健或治疗，无毒副作用和不良反应，并具有良好效果。同时，不像其它亚健康治疗法如中医疗法、自然疗法、运动、营养疗法等，自体造血干细胞移植后可以替代衰老的机体细胞，为亚健康人群治疗提供了良好的康复途径。
亚健康治疗造血干细胞技术