本发明公开了一种附着型慢病毒载体、制备方法及应用,属于生物技术领域。本发明中附着型慢病毒载体由pLRZM载体与包装系统共同转染宿主细胞获得,pLRZM载体为pLVX‑IRES‑ZsGreen1载体中土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件替换为人源性MAR序列或其95%以上同源序列所得,土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件序列如SEQ ID NO.2所示,人源性MAR序列如SEQ ID NO.3中第14~2161位碱基所示。该附着型慢病毒载体附着于宿主细胞染色体上,而非整合到宿主细胞染色体中,并且能够介导外源基因在哺乳动物细胞中稳定、高效、持久的表达,可用于基因治疗,具有广阔的市场前景。
本发明公开了一种检测土拨鼠肝炎病毒转录后增强元件WPRE的RNA探针及其制备方法与应用,属于核酸杂交技术领域,该探针的序列如文中SEQ ID NO.1所示,制备过程包括设计引物、PCR扩增、产物纯化、构建重组质粒、体外转录的过程;本发明能够特异、敏感、快速、简便地从组织样本中对WPRE的RNA进行检测,可以清晰地可视化检测和定位WPRE的RNA,从而能够在RNA水平上对WPRE基因的转录以及翻译规律进行阐述,该探针适用于检测目前的大部分重组腺相关病毒以及慢病毒等病毒中携带的WPRE元件,能够定性以及半定量检测WPRE在组织中的分布和表达量,在基因编辑和基因治疗领域具有广泛的应用前景。