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[发明专利]一种检测大豆转基因成分的质粒DNA标准分子及其应用-CN202010434705.X有效
发明人：李飞武;闫伟;李葱葱;龙丽坤;董立明;刘娜;邢珍娟;夏蔚;谢彦博 -专利权人：吉林省农业科学院
申请日： 2020-05-21 - 公布日： 2021-03-05 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本申请公开了一种检测转基因成分的质粒DNA标准分子及其重组表达质粒。所述质粒DNA标准分子中含有SEQ ID No.2—28所示DNA片段。通过检测这些个靶标可以覆盖目前商业化的绝大部分转基因品种。本发明的重组表达质粒克服了转基因大豆筛选检测、基因特异性和转化体特异性定性和定量PCR检测中缺乏阳性标准品的技术难题，满足转基因大豆成分检测需求。并且，经试验验证，所述重组表达质粒具有很好的特异性，无假阳性和假阴性结果产生，可商业化推广应用。
一种检测大豆转基因成分质粒 dna 标准分子及其应用

[发明专利]用于连续商业规模质粒生产的自动化整合系统-CN202180050785.1在审
发明人： S·R·休斯;付晓丽;李一凡;贺玉卓;李竑;吴政宪;孙川 -专利权人：南京金斯瑞生物科技有限公司;美国金斯瑞生物科技有限公司
申请日： 2021-08-17 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本申请提供了用于以商业规模制备纯化的质粒DNA的自动化系统。
用于连续商业规模质粒生产自动化整合系统

[发明专利]一种基因免疫方法-CN200810123602.0无效
发明人：宋成义;高波;谢飞;王宵燕;陈国宏;孙丽亚;赵芹;吴晗 -专利权人：扬州大学
申请日： 2008-05-22 - 公布日： 2008-10-08 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：所说的方法是以常规方法克隆目标基因cDNA，然后构建含目标抗原cDNA的真核表达载体重组质粒，以转座酶质粒作为免疫佐剂；将真核表达载体重组质粒和转座酶质粒按4∶1混匀，然后用基因包裹剂PEI按PEI∶质粒＝2∶1包裹，按每克体重注射1微克质粒的剂量为进行动物免疫。该方法能显著促进抗体效价的提高，建立了一种简单、经济、实用、高效的抗体制备方法，可以进行多种商业化抗体的生产。
一种基因免疫方法

[发明专利]增加商业化转基因植物产生的DNA构建体和方法-CN200480015511.5有效
发明人： L·吉尔伯特森;E·克里格尔;W·张;X·叶 -专利权人：孟山都技术有限公司
申请日： 2004-04-09 - 公布日： 2006-07-26 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明将非致死负性选择标记基因整合到DNA质粒的载体骨架DNA中，用于转化植物细胞。这些转基因被设计为在含有DNA质粒载体骨架DNA的植物细胞中表达非致死基因产物。用这些DNA质粒转化植物细胞增加了商业化植物的产生。
增加商业化转基因植物产生 dna 构建方法

[发明专利]一种闭合线性DNA制备方法-CN202310705124.9在审
发明人：喻明军;崔康乐;纪世春;何丽丽 -专利权人：通用生物（安徽）股份有限公司
申请日： 2023-06-14 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明制备方法包括如下步骤：S1：质粒构建：质粒为含有目的基因、质粒骨架的质粒，所述质粒骨架含有诱导型启动子、端粒酶序列，所述目的基因两端均有端粒酶识别位点；S2：诱导培养，得到闭合线状DNA分子混合物本发明公开的制备方法用于在大肠杆菌中通过诱导剂促使其表达端粒酶直接切割质粒，形成闭合线性DNA分子，可减少商业化酶的使用，大大节约成本，提高产量。
一种闭合线性 dna 制备方法

[发明专利]一种微小反应体系水平上的核酸恒温扩增检测方法-CN201510207451.7在审
发明人：方雪恩;王丽娟;陈旭;徐凌佳;孔继烈 -专利权人：上海速芯生物科技有限公司;复旦大学
申请日： 2015-04-28 - 公布日： 2015-07-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种微小反应体系水平上的核酸恒温扩增检测方法，具体步骤包括在200μl的PCR管中配制微小反应体系、恒温检测反应和结果判断，结果判断时在PCR管中加入2μl荧光显色剂，混匀，阳性质粒显现为绿色，阴性质粒显现为橙色，且阳性质粒显现S型扩增曲线，阴性质粒显现直线扩增曲线，阳性质粒、阴性质粒在该微小反应体系水平上均实现正常扩增。本发明利用微小反应体系为恒温核酸扩增技术提供一种降低原料用量和成本的新途径，能极大地节省恒温核酸扩增所用原料，降低所需成本，从而极大地推动恒温核酸扩增技术在基础理论研究领域的推广和商业化应用。
一种微小反应体系水平核酸恒温扩增检测方法

[发明专利]用于转基因大豆品系特异性检测的质粒标准分子及其应用-CN202210999568.3在审
发明人：曹际娟;胡冰;郑秋月;刘军山;朴永哲;李想 -专利权人：大连民族大学
申请日： 2022-08-19 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，提供了用于转基因大豆品系特异性检测的质粒标准分子及其应用。该质粒标准分子包含有用于鉴定17种转基因大豆的转基因成分的品系特异性边界序列的融合片段，所述品系特异性边界序列的融合片段的序列如SEQ ID NO：1所示。经试验验证，本发明提供的质粒标准分子能够同时适用17种转基因大豆品系的鉴定，可商业化推广应用。
用于转基因大豆品系特异性检测质粒标准分子及其应用

[发明专利]一种用于生物合成产(R)-薰衣草醇及乙酸酯的方法-CN202310846542.X在审
发明人：马晓强;杨佃琪 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2023-07-11 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12P7/04 文献下载
摘要：R)‑薰衣草醇及乙酸酯的方法，涉及生物合成领域，所述薰衣草醇及酯的生物合成方法，包括：1)将编码EcatoB，SchmgS，SchmgR，ScMK，Scpmk和ScPMD的基因插入SpecR+p15A质粒，在SpecR+p15A上引入甲羟戊酸途径，得到上游途径基因表达质粒；2)将编码薰衣草醇二磷酸合酶LiLPPS的基因和编码大肠杆菌核苷酸焦磷酸水解酶DTPP的基因插入AmpR+pMB1质粒，得到下游途径基因表达质粒；3)将步骤1)得到的所述上游途径基因表达质粒与步骤2)得到的所述下游途径基因表达质粒导入MG1655(DE3)构建了菌株。本发明首次实现天然(R)‑薰衣草醇及酯的微生物合成，为商业化生产提供了新的方法和思路。
一种用于生物合成薰衣草乙酸方法

[发明专利]一种家蝇抗菌肽Cecropin A的制备方法-CN201110098941.X无效
发明人：郑学礼;王炜 -专利权人：南方医科大学
申请日： 2011-04-20 - 公布日： 2011-10-19 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于混合多肽领域，提供一种家蝇抗菌肽Cecropin A的制备方法，该方法含有以下步骤：(克隆家蝇cecropin A和ubiquitin序列；构建pET32a-mc重组质粒；将ubiquitin基因扩增序列和pET32a-mc重组质粒酶切后相连，得到pET32a-ubiquitin&MC重组质粒；将pET32a-ubiquitin&MC重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞，经筛选，取阳性细胞该方法在大肠杆菌内高产量制备抗菌肽蛋白，产量高，成本低，可商业化大规模生产。
一种家蝇抗菌 cecropin 制备方法

[发明专利]一种包括虾青素合成酶融合基因的重组质粒、重组菌及应用-CN202010031650.8有效
发明人：何明霞;黄俊潮 -专利权人：中国科学院昆明植物研究所
申请日： 2020-01-13 - 公布日： 2021-06-29 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明提供了一种包括虾青素合成酶融合基因的重组质粒、重组菌及应用，属于基因工程育种技术领域。本发明将四个虾青素合成关键酶基因用2A短肽序列连接，并利用CaMV35S启动子控制表达，能够简化重组质粒(表达载体)的构建，并实现各基因的协同表达。将本发明的重组质粒导入亚麻荠植株，得到的亚麻荠转化植株的种子中合成并积累高含量类胡萝卜素，其中虾青素含量由0增加至15.23μg/gDW。同时该转化株系种子总抗氧化能力转化株系显著高于野生型。因此将本发明的重组质粒用于亚麻荠育种，并利用亚麻荠生产高品质的、兼具不饱和脂肪酸和类胡萝卜素的食用油具有极大的商业前景。
一种包括虾青素合成融合基因重组质粒应用

[发明专利]一种基因重组纤维素分解酵母菌方法-CN201210429311.0无效
发明人：李毅 -专利权人：贵州爱微生物技术有限责任公司
申请日： 2012-10-23 - 公布日： 2014-05-07 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：包括如下步骤：1、纤维素酶基因cDNA模板制备；2、基因克隆片段制备；3、将目标基因克隆片段嵌入载体质粒，构建基因重组质粒；4、基因重组质粒的筛选与鉴别；5、基因重组质粒导入酵母表达系统；6、基因重组酵母菌的筛选与鉴别本发明解决了混合菌种在使用过程中存在的天然不可调和矛盾，减少了分解体系内部之间的排斥作用，最终有效的提高纤维素的利用效率，减少分解时间，增加其商业价值，从根本上解决了自然界中最大可再生资源的高效利用问题
一种基因重组纤维素分解酵母菌方法

[发明专利]用于构建布鲁氏菌突变株的质粒pZF17-30及其构建方法和应用-CN201710696023.4有效
发明人：刘正飞;郑可;汪洋;李娜 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2017-08-14 - 公布日： 2021-03-02 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于构建布鲁氏菌突变株的质粒pZF17‑30及其构建方法和应用，构建过程主要包括从商业化质粒pCMV‑BE3中扩增rAPOBEC1‑nCas9‑UGI片段，并将该片段与含有泛宿主复制子pBBR1‑MCS‑5和非特异性sgRNA的载体通过重组反应整合到一起，随后将ccdB基因与Chl抗性基因插入sgRNA中；利用限制性内切酶BsaI酶切质粒pZF17
用于构建布鲁氏菌突变质粒 pzf17 30 及其方法应用

[发明专利]一种基于无缝克隆技术的全新质粒定点突变方法-CN202211714275.2在审
发明人：武志强 -专利权人：北京海创科业生物科技有限责任公司
申请日： 2022-12-29 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12Q1/6827 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于无缝克隆技术的全新质粒定点突变方法、试剂盒及应用，属于基因工程技术领域。该方法解决了质粒模板必须被甲基化的限制问题，通过使用极低的模板使用量1ng和极高的PCR扩增效率，使突变后的产物以极高的比例压制未被突变的模板质粒，此方法效率极高。使用该方法定点突变质粒不需要购买昂贵的商业化试剂盒，经济成本很低，适用范围更广。
一种基于无缝克隆技术全新质粒定点突变方法

[发明专利]一种Mesothelin抗原免疫组化参考品构建以及对应抗体筛选-CN202211610206.7在审
发明人：王恩秀;李强 -专利权人：南京卡提医学科技有限公司
申请日： 2022-12-14 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： G01N33/531 文献下载
摘要：本发明公开了一种Mesothelin免疫组织化学参考品构建的方法和应用，先将Mesothelin序列构建成质粒，再通过大肠杆菌扩培，提取出的质粒然后包装成慢病毒，通过慢病毒感染SKOV3细胞，将Mesothelin抗原表达在SKOV3细胞表面，获得高表达Mesothelin抗原的SKO V3细胞命名为SKOV3‑a，再使用该SKOV3‑a在免疫缺陷小鼠皮下造模，成瘤后取瘤进行包埋切片，再用该切片去优化购买的商业化
一种 mesothelin 抗原免疫参考构建以及对应抗体筛选

[发明专利]一种质粒当中宿主DNA残留测定方法-CN202311060518.X在审
发明人：喻明军;崔康乐;纪世春;陈子辉 -专利权人：通用生物（安徽）股份有限公司
申请日： 2023-08-22 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开了一种质粒当中宿主DNA残留测定方法，属于生物制品质量控制中残留杂质检测技术领域；测定方法包括如下步骤：第一步、将大肠杆菌基因组DNA溶液稀释，进行Qubit 4检测，测定基因组dsDNA含量；第二步、染料法荧光定量PCR：步骤A1、使用TE溶液稀释Qubit 4检测后的标准品，作为扩增模板制作标准曲线；质粒样品稀释后同标准品一同进行荧光定量PCR反应；步骤A2、荧光定量PCR扩增；步骤A3本发明中的自制染料法与商业化探针法都能有效测定质粒产品中大肠杆菌宿主DNA含量，但是探针法试剂盒较昂贵，而本发明中染料法使用成本相对较低。
一种质粒当中宿主 dna 残留测定方法

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