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[发明专利]一种快捷高通量的体外DNA序列修改方法-CN201310202937.2无效
发明人：李阳;李阳生;卢楠;李杨 -专利权人：武汉大学
申请日： 2013-05-28 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外DNA序列修改方法，该方法通过设计合成针对修改位置的突变引物，该突变引物的一端具有识别位点和酶切位点不重合的限制性内切酶识别序列，用待修改的目标DNA做模板，扩增并酶切，该突变引物包括：保护碱基、酶切识别位点、酶切位点、模板识别退火位点、DNA编辑位点，所述DNA编辑位点位于粘末端位点内或者模板识别退火位点内。本发明与常规PCR点突变法相比更为高效，快捷简单的DNA序列修改方法，此方法不仅适用于DNA的点突变，更适合于更大DNA片段的插入，缺失，修改。实现本方法的策略主要使用PCR扩增，typeIIS限制性内切酶酶切和连接酶连接来实现，该方法简捷，高效，每次可以对DNA上的多个位点同时进行突变。
一种快捷通量体外 dna 序列修改方法

[发明专利]一种检测核酸内切酶酶切位点的方法-CN201710522336.8有效
发明人：李卓坤;徐东洋;杨晋;顾颖;黎宇翔;陈奥;徐崇钧;章文蔚 -专利权人：深圳华大生命科学研究院
申请日： 2017-06-30 - 公布日： 2022-01-04 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测核酸内切酶酶切位点的方法。本发明利用芯片上数以十亿计的核酸序列来高通量系统性的检测核酸内切酶对DNA的识别切割位点及核心序列特征，采用两次测序分别获取碱基序列及正常的双链DNA，同时根据酶切前后荧光信号的改变，运用生物信息分析方法得到内切酶的识别切割位点通过对内切酶识别切割位点的研究，可检测内切酶的识别切割位点的倾向性，并且可以提前预测内切酶的星号活性及基因组编辑技术中内切酶的脱靶效应，同时，也可用于大规模筛选新型基因组编辑系统中使用的内切酶所需要识别的
一种检测核酸内切酶酶切位点方法

[发明专利]一种简单快速评估分子克隆体系效率的方法-CN201711482280.4有效
发明人：李阳 -专利权人：武汉艾德士生物科技有限公司
申请日： 2017-12-29 - 公布日： 2020-07-10 - 主分类号： G01N27/447 文献下载
摘要：本发明公开一种简单快速评估分子克隆体系效率的方法，设计一DNA片段，其上设置至少2个多克隆位点，所述多克隆位点内有待测限制性内切酶的酶切位点，且所述酶切位点只存在于所述多克隆位点上；同一内切酶在不同的所述多克隆位点内产生的粘性末端能够互补连接；对所述DNA片段酶切，将上述酶切产物经过连接酶连接后进行电泳，对形成的电泳条带进行分析：当电泳条带以较大片段或单一的完整载体片段存在，说明内切酶活性比较低或者没有活性；当电泳条带以较小片段存在，说明连接酶活性较低或者没有活性提供了一种评估分子克隆体系效率的方法，可以简单快速的测试酶切连接体系中的主要成分(内切酶或者连接酶)的活性。
一种简单快速评估分子克隆体系效率方法

[发明专利]鉴定文心兰品种的CAPS分子标记、筛选方法与应用-CN202110903428.7有效
发明人：孔兰;钟淮钦;樊荣辉;林榕燕;方能炎;林兵;罗远华;黄敏玲 -专利权人：福建省农业科学院作物研究所
申请日： 2021-08-06 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种鉴定文心兰品种的CAPS分子标记，包括SEQIDNO.1～SEQIDNO.12所示的序列，序列的筛选方法包括：基于文心兰6个品种的转录组数据获得SNP位点，并寻找可引起限制性内切酶识别位点改变的SNP位点，根据SNP位点的不同设计CAPS引物对；提取文心兰的基因组DNA；以所述CAPS引物对文心兰不同品种基因组DNA进行PCR扩增，获得目的片段；以限制性内切酶对所述目的片段进行酶切，并对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测和酶切产物多态性分析，如果品种间存在酶切产物多态性，则该SNP位点可作为鉴定文心兰品种的CAPS标记，该分子标记可应用于鉴定文心兰品种中。
鉴定文心兰品种 caps 分子标记筛选方法应用

[发明专利]一种建库方法及SNP分型方法-CN201610772852.1在审
发明人：盛司潼;黄思强 -专利权人：广州康昕瑞基因健康科技有限公司
申请日： 2016-08-30 - 公布日： 2018-07-20 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明提供了一种建库方法，包括：PCR扩增待测序样本，得到扩增产物；在扩增产物上连接接头一，得到含有IIS型限制性内切酶识别序列以及IIS型限制性内切酶切割位点的连接产物，接头一为双链核酸分子，IIS型限制性内切酶切割位点与待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基；采用IIS型限制性内切酶对连接产物进行酶切，得到含有待测SNP位点和接头一的第一核酸片段，第一核酸片段上经酶切形成第一末端；在第一核酸片段的第一末端处连接接头二，得到文库分子，接头二为含有测序引物结合位点的双链核酸分子。本发明还提供了一种SNP分型方法及检测SNP位点突变的试剂盒。本发明缩短了位点检测时间，提高了检测准确性，且统一了同一体系中进行多个位点检测的测序引物。
核酸片段双链核酸分子测序引物扩增产物连接产物连接接头切割位点建库酶切结合位点同一体系位点检测文库分子点检测末端处试剂盒个位检测测序碱基上经突变样本统一

[发明专利]测定人NEFL基因rs1059111位点多态性的方法及试剂盒-CN201510615052.4在审
发明人：余善法;王思华;卢艳艳;谷桂珍;崔守明;马军营 -专利权人：河南省职业病防治研究院
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2016-01-27 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：测定人NEFL基因rs1059111位点多态性的方法及试剂盒。该方法包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人NEFL基因rs1059111位点附近序列的上游引物和下游引物，其中上游引物具有错配碱基C；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含TCGW片段的扩增产物，其中W为人NEFL基因rs1059111位点上的待定碱基A或T；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人NEFL基因rs1059111位点上的待定碱基W是A还是T。限制性内切酶为仅能够切开TCGA或TCGT片段之一的限制性内切酶。本发明的测定手段不但快速可靠，而且测定成本大大降低。
测定 nefl 基因 rs1059111 多态性方法试剂盒

[发明专利]测定人TERT基因rs4975605位点多态性的方法及试剂盒-CN201510618640.3在审
发明人：姚武;王思华;王娜;吴逸明;李春阳;段晓冉;冯晓蕾;王团伟;王彭彭;杨永利;施学忠;王威 -专利权人：郑州大学
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2016-02-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：测定人TERT基因rs4975605位点多态性的方法及试剂盒。该方法包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人TERT基因rs4975605位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基A；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含GMAAGCCTTC片段的扩增产物，其中M为人TERT基因rs4975605位点上的待定碱基A和C；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人TERT基因rs4975605位点上的待定碱基M是A还是C。限制性内切酶为仅能够切开GAAAGCCTTC片段与GCAAGCCTTC片段之一的限制性内切酶。本发明的测定手段不但快速可靠，而且测定成本大大降低。
测定 tert 基因 rs4975605 多态性方法试剂盒

[发明专利]一种针对cfDNA的简化甲基化测序方法及应用-CN201811300568.X有效
发明人：许明炎;屈宏越;张晓妮;方文 -专利权人：深圳海普洛斯医学检验实验室
申请日： 2018-11-02 - 公布日： 2020-05-19 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明提供了一种针对cfDNA的简化甲基化测序方法及应用，所述方法包括以下步骤：(1)采用识别TpA位点的限制性内切酶酶切cfDNA；(2)将酶切的cfDNA连接接头序列，构建cfDNA测序文库。本发明采用能够识别TpA位点的限制性内切酶酶切cfDNA，将富含T/A的片段切割为长度较小的片段，而富含C/G的片段不被切割，使得富含C/G的片段和富含T/A的片段长度具有较大的差异，实现了在cfDNA中有效富集含有CpG位点的片段的目的，有利于增加CpG位点的测序深度，提高检测的灵敏性。
一种针对 cfdna 简化甲基化方法应用

[发明专利]一种建库方法及SNP分型方法-CN201610773096.4有效
发明人：盛司潼;黄思强 -专利权人：武汉康昕瑞基因健康科技有限公司
申请日： 2016-08-30 - 公布日： 2021-11-09 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提供了一种建库方法，包括：A、利用特异性扩增引物组对含待测SNP位点的待测序样本进行PCR扩增，得到扩增产物；所述引物组中的至少一种引物上含有IIS型限制性内切酶识别序列，所述扩增产物上含有IIS型限制性内切酶切割位点，所述IIS型限制性内切酶切割位点与所述待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基；B、采用IIS型限制性内切酶对扩增产物进行酶切，得到含有待测SNP位点的第一核酸片段，且所述第一核酸片段上经酶切形成第一末端；C、在连接酶作用下，所述第一核酸片段在第一末端处连接测序接头，得到文库分子。本发明缩短了位点检测时间，提高了检测的准确性，且统一了同一体系中进行多个位点检测的测序引物。
一种方法 snp

[发明专利]基于3-臂DNA分子的DNA计算机广义表数据结构设计方法-CN200810207759.1无效
发明人：丁永生;李汪根;任立红 -专利权人：东华大学
申请日： 2008-12-25 - 公布日： 2009-06-17 - 主分类号： G06F19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于3-臂DNA分子的DNA计算机广义表数据结构设计方法，包括表结点数据元素和原子结点数据元素，其特征在于，所述的方法包括下列步骤：(1)设计限制性内切酶的识别位点E(i)；(2)设计限制性内切酶的识别位点Eh；(3)设计限制性内切酶的识别位点Et；(4)设计特定的DNA序列stick；其中特定的DNA序列包括s，s1，s2；(5)设计特定的DNA序列element；(6)设计限制性内切酶的识别位点Ec；(7)设计限制性内切酶的识别位点E。
基于 dna 分子计算机广义数据结构设计方法

[发明专利]人TERT基因rs2853669位点多态性检测方法及试剂盒-CN201510615764.6在审
发明人：施学忠;杨永利 -专利权人：郑州大学
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2015-11-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：人TERT基因rs2853669位点多态性检测方法及试剂盒。该方法，包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人TERT基因rs2853669位点附近序列的上游引物和下游引物，其中上游引物具有错配碱基G；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含GGTYC片段或GACCGCGGTY片段的扩增产物，其中Y为人TERT基因rs2853669位点上的待定碱基C或T；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人TERT基因rs2853669位点上的待定碱基Y是C还是T。限制性内切酶为能够切开GGTTC片段与GGTCC片段之一的限制性内切酶,或能够切开GACCGCGGTT片段与GACCGCGGTC片段之一的限制性内切酶。
tert 基因 rs2853669 多态性检测方法试剂盒

[发明专利]一种人TERT基因rs2853669位点多态性检测技术-CN201510615628.7在审
发明人：余善法;谷桂珍;姜开友;吕玉民;王思华;韩林 -专利权人：河南省职业病防治研究院
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2015-11-18 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：一种人TERT基因rs2853669位点多态性检测技术。该方法包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人TERT基因rs2853669位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基C；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含YCCGA或TYCCGA片段的扩增产物，其中Y为人TERT基因rs2853669位点上的待定碱基C或T；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人TERT基因rs2853669位点上的待定碱基Y是C还是T。限制性内切酶为能够切开CCCGA片段与TCCGA片段之一的限制性内切酶,或能够切开TCCCGA片段与TTCCGA片段之一的限制性内切酶。本发明的测定手段不但快速可靠，而且测定成本大大降低。
一种 tert 基因 rs2853669 多态性检测技术

[发明专利]人NEFL基因rs1059111位点多态性检测方法及试剂盒-CN201510618709.2在审
发明人：王思华;余善法;肖庆峰;秦文华;王喜爱 -专利权人：河南省职业病防治研究院
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2016-01-20 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：人NEFL基因rs1059111位点多态性检测方法及试剂盒。该方法包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人NEFL基因rs1059111位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基C；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含GWCGAC片段的扩增产物，或含WCGA的扩增产物，其中W为人NEFL基因rs1059111位点上的待定碱基A或T；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人NEFL基因rs1059111位点上的待定碱基W是A还是T。限制性内切酶为仅能够切开GTCGAC片段与GACGAC片段之一的限制性内切酶，或为仅能够切开TCGA或ACGA片段之一的限制性内切酶。该测定手段不但快速可靠，而且测定成本大大降低。
nefl 基因 rs1059111 多态性检测方法试剂盒

[发明专利]测定人TERT基因rs2735940位点多态性的方法及试剂盒-CN201510615669.6有效
发明人：王威;段晓冉;吴拥军;冯斐斐;李尊税;王团伟;王彭彭;李春阳;姚武;杨永利;施学忠 -专利权人：郑州大学
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2018-11-30 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：测定人TERT基因rs2735940位点多态性的方法及试剂盒。该方法，包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人TERT基因rs2735940位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基C；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含CYGG或CCYGG片段的扩增产物，其中Y为人TERT基因rs2735940位点上的待定碱基C或T；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人TERT基因rs2735940位点上的待定碱基Y是C还是T。限制性内切酶为能够切开CCGG片段与CTGG片段之一的限制性内切酶,或能够切开CCCGG片段与CCTGG片段之一的限制性内切酶。本发明的测定手段不但快速可靠，而且测定成本大大降低。
测定 tert 基因 rs2735940 多态性方法试剂盒

[发明专利]测定人POT1基因rs1034794位点多态性的方法及试剂盒-CN201510618707.3在审
发明人：崔留欣;段晓冉;郜继恩;李会芳;刘祥;冯晓蕾;姚武;杨永利;施学忠;王威 -专利权人：郑州大学
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2015-11-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：测定人POT1基因rs1034794位点多态性的方法及试剂盒。该方法，包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人POT1基因rs1034794位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基A；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含WATT片段的扩增产物，其中W为人POT1基因rs1034794位点上的待定碱基A或T；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人POT1基因rs1034794位点上的待定碱基W是A还是T。限制性内切酶为仅能够切开AATT片段与TATT片段之一的限制性内切酶。本发明的测定手段不但快速可靠，而且测定成本大大降低。
测定 pot1 基因 rs1034794 多态性方法试剂盒

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