[发明专利]一种特殊膳食蛋白质的生产方法与应用在审
| 申请号： | 201910923821.5 | 申请日： | 2019-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN110747218A | 公开（公告）日： | 2020-02-04 |
| 发明（设计）人： | 宋保平;刘海峰;李春艳;陈火晴;姚琦 | 申请（专利权）人： | 深圳市诺维健生物技术有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N15/90;C12N15/57;C12N1/21;C12N9/54;A23L33/195;A61K38/48;A61P19/06;C12R1/10 |
| 代理公司： | 42222 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 彭劲松 |
| 地址： | 518118 广东省深圳市坪山区龙田街道*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种特殊膳食蛋白质的生产方法与应用。以芽孢杆菌来源的蛋白酶蛋白序列作为模板，进行苯丙氨酸的敲除替换，并进行部分氨基酸的重排，从而保证无苯丙氨酸蛋白在发酵过程中具有蛋白酶特异性活力，降解掉其他杂蛋白或者抑制其他杂蛋白的生长；采用补料发酵工艺延长菌种对数生长期时间，提高蛋白表达量，同时对后处理工艺进行优化，得到的蛋白粉纯度高，口感佳。获得的重组无苯丙氨酸蛋白中LNAA与Phe的比值超过100倍，可有效降低血液中的苯丙氨酸进入大脑。按照本专利方法生产无/低苯丙氨酸的蛋白粉的生产成本可降低至普通蛋白制品的价格，有巨大的实际应用价值和广阔的市场前景。 | ||
| 搜索关键词： | 苯丙氨酸 蛋白粉 杂蛋白 蛋白 芽孢杆菌来源 蛋白酶 蛋白表达量 蛋白酶蛋白 对数生长期 膳食蛋白质 后处理 补料发酵 蛋白制品 发酵过程 丙氨酸 性活力 重排 氨基酸 低苯 降解 敲除 菌种 生产成本 替换 应用 大脑 血液 生产 生长 优化 保证 | ||
【主权项】：
1.一种表达重组无苯丙氨酸蛋白PKU2的地衣芽孢杆菌重组工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)表达菌种中原始基因的敲除/n(1)敲除质粒的构建；/n以地衣芽孢杆菌CICC10266的基因组DNA为模板，用表1中的引物apr-up-F/apr-up-R，apr-down-F/apr-down-R，PCR扩增上游同源臂apr-up和下游同源臂apr-down，然后以apr-up-F/apr-down-R为引物，通过重叠PCR扩增apr-up+down，并用DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒回收PCR片段；以pEBKan194-GFP质粒为模板，用表1中的引物pEBKan194-F/pEBKan194-R，PCR扩增约5300bp的载体骨架片段，并用DpnI内切酶消化后DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒回收载体骨架片段，将载体骨架与up+down重叠片段进行组装，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选到的阳性菌株进行DNA测序确认，测序正确的阳性菌株用质粒提取试剂盒抽提质粒备用；该质粒命名为pEBKan194-GFP-apr-up+down；/n表1. pEBKan194-GFP-apr-up+down载体构建引物/n
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