[发明专利]一种特立帕肽的制备方法在审
| 申请号： | 201910240604.6 | 申请日： | 2019-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN109897099A | 公开（公告）日： | 2019-06-18 |
| 发明（设计）人： | 冷国庆;张琪;苏宏健;王丽莉;田辉;杨文龙;余荣熹;景文岩;王艳;张凤莲;侯继元;谢俊;杨桦;于通浩;冷青 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/635 | 分类号： | C07K14/635;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 150025 黑龙江省哈*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种特立帕肽的制备方法，包括以下步骤：在活化剂和偶联试剂的作用下，采用2‑CTC树脂作为树脂载体和Fmoc‑Phe‑OH偶联得到Fmoc‑Phe‑树脂；向Fmoc‑Phe‑树脂中加入Fmoc脱保护试剂，反应结束后并用N，N‑DMF洗涤后得到Phe‑树脂，在缩合试剂和活化试剂作用下，对氨基酸进行逐一延伸偶联，得到特立帕肽‑树脂；向特立帕肽‑树脂中加入含有PhSMe/PhOH/EDT体系的裂解液，得到特立帕肽粗品；将特立帕肽粗肽采用C18柱进行分离纯化，冻干，得到高纯度特立帕肽。本发明特立帕肽的制备方法成本低、工艺简单，本发明提高了特立帕肽的总收率，并且对任何环境无危害。适合大规模化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 特立帕肽 树脂 制备 偶联 大规模化生产 脱保护试剂 分离纯化 活化试剂 偶联试剂 树脂载体 缩合试剂 氨基酸 高纯度 活化剂 裂解液 总收率 粗品 粗肽 冻干 洗涤 并用 延伸 | ||
【主权项】：
1.一种特立帕肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备Fmoc‑Phe‑树脂：在活化剂和偶联试剂的作用下，采用2‑CTC树脂作为树脂载体和Fmoc‑Phe‑OH偶联得到Fmoc‑Phe‑树脂；(2)制备特立帕肽‑树脂复合物：向步骤(1)得到的Fmoc‑Phe‑树脂中加入Fmoc脱保护试剂，反应结束后并用N，N‑DMF洗涤后得到Phe‑树脂，在缩合试剂和活化试剂作用下，按照特立帕肽从C端到N端的顺序，对氨基酸进行逐一延伸偶联，每次延伸偶联后均得到对应的肽树脂，得到特立帕肽‑树脂；(3)制备特立帕肽粗品：向步骤(2)中得到的特立帕肽‑树脂中加入含有PhSMe/PhOH/EDT体系的裂解液，脱除多肽侧链保护基并将特立帕肽从树脂上脱下，得到特立帕肽粗品；(4)精制特立帕肽：特立帕肽粗肽采用C18柱进行分离纯化，冻干，得到高纯度特立帕肽。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于哈尔滨吉象隆生物技术有限公司，未经哈尔滨吉象隆生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910240604.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 治疗骨质疏松的α-螺旋多肽及其制备方法与应用-201511027787.1
- 苏贤斌;郭伦迪;汤同洋;李裴竹 - 南京工业大学
- 2015-12-31 - 2019-10-25 - C07K14/635
- 本发明公开了一种PTH(1‑34)肽衍生物。本发明还公开了上述PTH(1‑34)肽衍生物的制备方法和应用，提出了一种PTH(1‑34)衍生物为在相对应PTH(1‑34)序列第i和i+4或者i和i+7的位置上的氨基酸用Cys替换，然后通过连接臂(linker)成环后形成的化合物，其中当位置为i和i+4时，i的取值为15、17、18、20、22、25、26、27、29。当位置为i和i+7，i的取值为19、22、25、26。本发明制备的PTH(1‑34)衍生物具有长于PTH(1‑34)的体内药效时间，特别适于在制备骨质疏松症的药物中作为该药物的活性成分。
- 一种特立帕肽醋酸盐的纯化及离子控制方法-201810119038.9
- 刘晓锐;孟俊东;刘彬;丁伟伟;汤传根;徐勇刚;陈松;张昊宁 - 美药星（南京）制药有限公司
- 2018-02-06 - 2019-07-12 - C07K14/635
- 本发明提供一种特立帕肽醋酸盐的纯化及离子控制方法，包括以下步骤：1)：将粗肽溶液使用碳酸氢铵水溶液的乙腈体系进行第一次纯化；2)：将上述收集的洗脱液使用硫酸钠/硫酸的乙腈体系进行第二次纯化；3)：将收集的洗脱液先用醋酸铵水溶液乙腈体系洗脱，再用醋酸水溶液乙腈体系洗脱进行高效液相转盐；4)：将转盐后的洗脱液减压浓缩后加入盐酸。本发明具有以下优点：通过多次纯化以及转盐后加入盐酸进行醋酸根等离子含量控制相结合，使用不同的色谱系统，规模化制备得到的特立帕肽醋酸盐纯度大于99％，蛋氨酸亚砜特立帕肽杂质总和≤0.50％且最大未知单杂≤0.10％，醋酸根离子含量≤5％，氯离子含量≤4％，三氟乙酸根和硫酸根含量均≤0.1％，总收率大于60％。
- 一种特立帕肽的制备方法-201910240604.6
- 冷国庆;张琪;苏宏健;王丽莉;田辉;杨文龙;余荣熹;景文岩;王艳;张凤莲;侯继元;谢俊;杨桦;于通浩;冷青 - 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司
- 2019-03-27 - 2019-06-18 - C07K14/635
- 本发明公开了一种特立帕肽的制备方法，包括以下步骤：在活化剂和偶联试剂的作用下，采用2‑CTC树脂作为树脂载体和Fmoc‑Phe‑OH偶联得到Fmoc‑Phe‑树脂；向Fmoc‑Phe‑树脂中加入Fmoc脱保护试剂，反应结束后并用N，N‑DMF洗涤后得到Phe‑树脂，在缩合试剂和活化试剂作用下，对氨基酸进行逐一延伸偶联，得到特立帕肽‑树脂；向特立帕肽‑树脂中加入含有PhSMe/PhOH/EDT体系的裂解液，得到特立帕肽粗品；将特立帕肽粗肽采用C18柱进行分离纯化，冻干，得到高纯度特立帕肽。本发明特立帕肽的制备方法成本低、工艺简单，本发明提高了特立帕肽的总收率，并且对任何环境无危害。适合大规模化生产。
- 一种特立帕肽的制备方法-201910240605.0
- 冷国庆;张琪;苏宏健;王丽莉;田辉;杨文龙;余荣熹;景文岩;王艳;张凤莲;侯继元;谢俊;杨桦;于通浩;冷青 - 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司
- 2019-03-27 - 2019-06-14 - C07K14/635
- 本发明公开了一种特立帕肽的制备方法，包括以下步骤：在偶联试剂和活化试剂的作用下，树脂固相载体和Fmoc‑Phe‑OH偶联反应，得到Fmoc‑Phe‑树脂；按照特立帕肽氨基酸序列C端到N端的顺序，从Fmoc‑Phe‑树脂出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将其余保护氨基酸进行逐一延伸偶联，每次延伸偶联后均得到对应的肽树脂；采用含NH4I/Me2S的TFA体系的裂解液，裂解3小时，将肽链从肽树脂上脱下，经过初步纯化、精制即得特立帕肽。本发明特立帕肽的制备方法制备的成品纯度高、成本低，适合大规模化生产。
- 一种片段法固液结合制备特立帕肽的方法-201511024053.8
- 张颖;陈雷;王仁友;李同金;石鑫磊 - 济南康和医药科技有限公司
- 2015-12-30 - 2019-05-14 - C07K14/635
- 本发明属于多肽合成领域，涉及一种固液结合制备特立帕肽的方法，本发明采用液相方式合成部分二肽及三肽片段，再以所合成的二肽及三肽片段进行投料，减少了13步固相偶联反应，大幅提高了偶联效率，不仅避免难以纯化除去的34位末端消旋杂质的产生，而且也避免了多个位点缺失肽的生成，最终目标肽纯度达到75％以上。与现有技术相比，本发明合成路线简单，固相偶联步数少，着重解决了肽序过长偶联困难，容易产生缺失肽的难题，且片段合成技术成熟，物料成本降低，能够进行工业大规模生产。
- 一种阿巴帕肽的制备方法-201910172437.6
- 顾海东;金晶;胡琦玉;刘婷婷;陈英;陈丰 - 苏州科技大学
- 2019-03-07 - 2019-05-10 - C07K14/635
- 本发明涉及多肽药物制备技术领域，提供了一种阿巴帕肽的制备方法，首先在缩合体系作用下，以Fmoc保护的氨基树脂为载体，将全Fmoc保护氨基酸、Fmoc‑Leu‑Leu‑OH二肽片段和Fmoc‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑OH三肽片段按照阿巴帕肽主链肽序从C端至N端的顺序进行缩合，得到阿巴帕肽‑氨基树脂；再将阿巴帕肽‑氨基树脂进行裂解、纯化和冻干处理，得到阿巴帕肽。本发明提供的制备方法步骤简单、原料消耗低，并且产品产率高、纯度高，适合规模化工业生产。
- 一种特立帕肽的制备方法-201710607171.4
- 王卫国;章方良;刘承 - 江苏金斯瑞生物科技有限公司
- 2017-07-24 - 2018-12-28 - C07K14/635
- 本发明公开了一种特立帕肽的制备方法，包括以下步骤：(1)采用树脂为固相载体，与特立帕肽C端氨基酸酯化，制备氨基酸‑树脂复合物；(2)采用Fmoc策略固相多肽合成方法，制备保护的特立帕肽‑树脂复合物；(3)采用切割试剂脱除侧链保护基并将特立帕肽从树脂上裂解下来，乙醚沉淀后得到特立帕肽粗品；(4)采用高效液相法纯化粗品，得到特立帕肽精品。本发明适合简便、高效制备特立帕肽。本发明解决了现有方法复杂、副反应多的问题。
- 一种合成特立帕肽的方法-201510295556.2
- 文永均;郭德文;曾德志;马中钢 - 成都圣诺生物科技股份有限公司
- 2015-06-02 - 2018-08-17 - C07K14/635
- 本发明涉及医药合成领域，公开了一种合成特立帕肽的方法。所述方法将N端偶联有保护基的Phe在偶联试剂和活化试剂作用下和HMP Linker树脂进行酯化反应，得到肽树脂1；按照特立帕肽氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将其余保护氨基酸进行逐一延伸偶联，每次延伸偶联后均得到对应的肽树脂，最终获得特立帕肽树脂，然后酸解获得特立帕肽粗品，特立帕肽粗品纯化转醋酸盐得到特立帕肽纯品。本发明选择合适的合成方案，选择HMP Linker树脂作为载体树脂，并优化了整个合成工艺，获得了高纯度产品，提高了特立帕肽的总收率，并且对任何环境无危害。
- 利用G蛋白偶联受体和相关组合物的筛选方法-201410242852.1
- 托马斯·J·加德拉;约翰·T·波茨;清水胜;市川文彦;哈拉尔德·朱佩内尔;冈崎诚 - 总医院有限公司;中外制药株式会社
- 2008-08-01 - 2017-09-22 - C07K14/635
- 本发明涉及利用G蛋白偶联受体和相关组合物的筛选方法，其提供了用于GPCR的筛选方法，其基于以下发现当未结合于G蛋白时，受体激动剂对于GPCR(如甲状旁腺激素受体)的亲和力与其间激动剂有效的时间长度有关，而与它的药物动力学特性无关。本发明还提供了PTH和PTHrP来源的多肽。
- 一种大规模分离纯化特立帕肽（Teriparatide）的方法-201610739782.X
- 刘志国;李雪豪;纪东亮;秦德志 - 杭州湃肽生化科技有限公司
- 2016-08-29 - 2016-11-30 - C07K14/635
- 本发明涉及一种利用反相高效液相色谱大规模分离纯化特立帕肽的一种方法，包括以下步骤：特立帕肽粗品溶解在30%乙腈水溶液中，超声处理，滤膜过滤，取滤液待用；使用高效液相色谱仪器对过滤后的粗品进行分离纯化；将浓缩液经过反相柱换盐转成醋酸盐；将转好醋酸盐且纯度99%以上产品进行减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，得到粉末状产品，经检测合格即为最终产品。该方法操作方便，无需过多的生成设备；所得产品纯度高且生产收率高，产品纯度达到99%以上，纯化回收率达到60%以上；此工艺可满足大规模工业化生成的需求。
- 用于PTH的纯化方法-201480046603.3
- 桑吉乌·库马尔·门迪拉塔;桑贾伊·班迪奥帕迪亚伊;阿万尼什·库马尔·辛格 - 卡迪拉保健有限公司
- 2014-08-21 - 2016-04-06 - C07K14/635
- 本发明涉及用于纯化重组甲状旁腺激素(rhPTH1-34或特立帕肽)的改善方法，所述用于纯化甲状旁腺激素的方法包括以下必要步骤：(a)酶促切割；(b)阴离子交换色谱，接着是其他合适的纯化步骤；其中能够以任何顺序进行步骤(a)和(b)。
- 一种特立帕肽的固相合成方法-201510005427.5
- 冷国庆;余荣熹;王丽莉;王艳;迟帅;田辉;张琪;李迎新 - 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司
- 2015-01-07 - 2015-04-22 - C07K14/635
- 本发明提供一种特立帕肽的固相合成方法，包括如下步骤：以Wang树脂为树脂固相载体，和N端Fmoc保护的苯丙氨酸(Fmoc-Phe-OH)偶联得到Fmoc-Phe-树脂；以HOBT/DIC、HBTU/DIEA或TBTU/DIEA为缩合剂，通过固相合成法，按照特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，得到特立帕肽肽树脂；然后对特立帕肽肽树脂进行裂解，脱除保护基和树脂，加入无水乙醚析出，得到特立帕肽粗肽；采用C18柱进行分离纯化，冻干，得到特立帕肽。
- 一种制备特立帕肽的方法-201410262511.0
- 陈晓航;路杨;杨东晖;周亮 - 杭州诺泰制药技术有限公司
- 2014-06-13 - 2014-09-03 - C07K14/635
- 本发明涉及一种制备特立帕肽的方法，本发明具体步骤为：A）在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂；B）通过固相合成法，按特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中肽序16-17位氨基酸采用假脯氨酸二肽Fmoc-Asn(Trt)-Ser(ψMe,MePro)-OH代替原16-17位置两个氨基酸进行偶联；C）肽树脂裂解采用含NH4I/Me2S的TFA体系的裂解液，粗品经HPLC纯化、冻干得到特立帕肽，其工艺杂质Met8(O)-特立帕肽含量小于0.1%。本发明提供了一种纯度高、成本低，适合规模化生产的特立帕肽制备工艺，此工艺既有效控制Met8(O)-特立帕肽含量又不影响特立帕肽的总收率。
- 一种特立帕肽的制备方法-201310403743.9
- 朱日成;宓鹏程;马亚平;袁建成 - 深圳翰宇药业股份有限公司
- 2013-09-06 - 2013-12-25 - C07K14/635
- 本发明属于药物化学技术领域，涉及一种肽的制备方法，具体涉及一种特立帕肽的制备方法。所述方法包括以下步骤：1）采用固相合成法，在固相载体上依照特立帕肽的氨基酸序列从碳端开始顺次偶联氨基酸，偶联17位丝氨酸时采用Boc-Ser-OH为原料，其中使所述17位丝氨酸的游离羟基与16位天冬酰胺的羧基进行酯缩合，然后再依次偶联其他氨基酸；2）裂解得到粗肽后，将所述17位丝氨酸和16位天冬酰胺之间的酯键转换为酰胺键，得到特立帕肽粗肽溶液。本发明的特立帕肽的制备方法新颖，提高了特立帕肽的纯度，且操作简便实用，总收率高，纯度高，成本低，利于工业化生产。
- 一种特立帕肽醋酸盐的纯化方法-201210514757.3
- 赵忠卫;刘建;马亚平;袁建成 - 深圳翰宇药业股份有限公司
- 2012-12-05 - 2013-03-27 - C07K14/635
- 本发明提供了一种特立帕肽醋酸盐的纯化方法，包括以下步骤：以体积比10%—30%的醋酸和5%—20%的乙腈水溶液溶解粗肽；将粗肽溶液进行梯度洗脱纯化，以体积比0.1%—0.4%的硫酸和体积比0.1%—0.4%醋酸的水溶液用氨水调pH值5.0—6.0后的溶液为A相，乙腈为B相，梯度：B%：20%—40%洗脱；盐析；用含3%—10%乙腈的醋酸铵溶液冲洗，用十八烷基硅烷键合硅胶高效液相色谱进行转盐，醋酸水溶液乙腈体系洗脱。本发明的目的是提供一种操作简单、高收率、纯度高、有利于实现产业化的特立帕肽的纯化方法。
- 一种高活性的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白及其活性检测方法-201210001319.7
- 金坚;邱爽;朱瑞宇;陈蕴;高明珠;付强;雷楗勇;姜曰水;储敏;李英 - 江南大学
- 2012-01-05 - 2012-11-14 - C07K14/635
- 本发明“一种高活性人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白及其活性检测方法”属于蛋白质药物领域。本发明通过对天然人甲状旁腺激素(1-34)的第25、26、27位氨基酸进行置换，发现了一种高活性的人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白。本发明还建立了一种快速的稳定的活性检测方法，可以在3-10天内对一种或多种蛋白质或多肽类药物进行活性检测，并与人甲状旁腺激素标准品进行比较。活性检测结果显示上述人甲状旁腺激素(1-34)突变蛋白的活性优于标准品，因此有望成为疗效更强，副作用更小的骨质疏松治疗药物。
- 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法-201210213044.3
- 肖庆;刘建;马亚平;袁建成 - 深圳翰宇药业股份有限公司
- 2012-06-26 - 2012-10-17 - C07K14/635
- 本发明属于药物化学技术领域，公开了一种治疗骨质疏松多肽的制备方法，具体说是一种特立帕肽的制备方法。所述制备方法为制备组成特立帕肽的各肽树脂片段，将各肽树脂片段在固相上逐步偶联特立帕肽树脂，然后裂解得到特立帕肽粗品，纯化得到产品特立帕肽。与现有技术相比，本发明所述制备方法操作简单、合成周期短、成本低、环境污染小、特立帕肽收率高，总收率大于30%，适合于特立帕肽大规模产业化生产，并且制得的特立帕肽纯度高、副产物少，具有可观的经济实用价值和广泛的应用前景。
- 甲状旁腺激素衍生物-201110144843.5
- 赵斌;彭红卫;杨伟;张宝华;董佳里;谭枫于;赵凯 - 成都金凯生物技术有限公司;苏州金盟生物技术有限公司
- 2011-05-31 - 2012-04-04 - C07K14/635
- 本发明公开了一种甲状旁腺激素衍生物，它具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列，在第26位的赖氨酸的ε-氨基上通过谷氨酸作为间隔基连有一个具有12到40个碳原子并且选择性地含有一个可以带负电荷基团的亲脂性基团W，得到PTH的衍生物，该衍生物与PTH相比其体内半衰期大大延长，从而可以降低PTH的给药频率，提高了药物的顺应性和治疗效果。
- 作为甲状旁腺激素(PTH)受体激动剂的短链肽-201080017579.2
- 拉杰什·巴赫卡尔;穆库尔·R·贾因;潘卡伊·R·帕特尔 - 卡迪拉保健有限公司
- 2010-04-26 - 2012-04-04 - C07K14/635
- 本发明提供了新型短链肽，其主要作为甲状旁腺激素(PTH/PTH-I)受体激动剂发挥作用。这些短链肽显示出对蛋白水解切割的稳定性增加。发现大多数短链肽在大鼠血浆中稳定长达24小时(体外)，显示对GIT酶(例如胃蛋白酶)和胃酸性pH值以及对肝微粒体的稳定性(体外)增加。由于代谢稳定性增加，除了胃肠外施用途径之外，一些短链肽还可以通过口服施用途径递送，以用于治疗/预防甲状旁腺机能减退症和以骨量减少为特征的疾病(例如骨质疏松症、绝经后骨质疏松症)以及用于刺激骨修复。A-Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-Z11-Z12-Z13-Z14-Z15-B。
- 甲状旁腺素类似物-201010150544.8
- 董正欣 - 益普生药业公司
- 1996-07-03 - 2010-10-06 - C07K14/635
- 甲状旁腺素片段(1-34)的肽变体，其中在位于7，11，23，24，27，28和31位的氨基酸残基中至少有一个是环己基丙氨酸，或在位于3，16，17，18，19和34位的氨基酸残基中至少有一个是α-氨基异丁酸；或者，至少在1位的氨基酸残基是α，β-二氨基丙酸，27位的氨基酸残基是高精氨酸，或31位的氨基酸残基是正亮氨酸。
- 具有环状构象的截短的PTH多肽-200780051022.9
- T·S·吕厄;M·施塔尔胡特;C·B·克努森;B·D·拉尔森 - 西兰岛药物有限公司
- 2007-12-06 - 2009-12-09 - C07K14/635
- 本发明提供PTH肽，其为截短的PTH片段PTH(1-17)的环化取代类似物，且优选保留了期望的或相似的人类PTH(1-34)的生物学活性。
- 作为PTH受体调节剂的聚乙二醇化的PTH及其用途-200780038209.5
- P·L·布朗-奥格斯布格尔;W·D·科恩 - 伊莱利利公司
- 2007-10-04 - 2009-09-02 - C07K14/635
- 本发明提供了用于在哺乳动物中治疗和预防骨损失疾病(包括骨质疏松症)的药物组合物和方法。
- 专利分类
