[发明专利]三棱中抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用

摘要

本发明提供一种从三棱中提取抗肿瘤活性组分的方法，步骤如下：干燥三棱粉碎成超微粉；使用乙酸乙酯提取，离心取上清；一维分离采用Silica正相硅胶色谱柱，正己烷、乙醇二元流动相，洗脱方式为B相浓度由0％至30％梯度洗脱，收集10-17.5min洗脱液；二维分离采用Silica正相硅胶色谱柱，正己烷、乙醇二元流动相，洗脱方式为B相浓度5％等度洗脱，收集13.5-14.5min洗脱液，即得纯度达98％的目的组分。该方法采用高效液相色谱进行分离纯化，分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时。实验发现该目的组分对Hep-g2和A549具抑制作用，故具有抗癌药物开发潜力，为新药研发提供理论依据。

主权项

一种三棱中抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于包括以下步骤：(1)超低温粉碎：取干燥的三棱为原料，进行超微粉碎5～20min，得到超微粉；(2)乙酸乙酯提取：在超微粉中加入乙酸乙酯，超微粉与乙酸乙酯的料液比为1︰(8～10)，70～75℃加热1～3小时进行提取，离心取沉淀重复1～3次，合并提取的上清并浓缩干燥，为粗提组分；(3)色谱分离：(a)一维分离：取粗提组分用40％乙醇‑正己烷溶液20～60℃超声溶解至浓度为60～100mg/ml，过膜后通过高压制备液相色谱进行分离，采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用A流动相为正己烷、B流动相为乙醇的二元流动相体系，进样量为100～150mL/针，流动相流速为550～600mL/min，洗脱方式为B相浓度由0％至30％梯度洗脱，检测波长为210～280nm，根据紫外吸收光谱收集10‑17.5min洗脱液作为目的组分，经浓缩后真空冷冻干燥，得到一维液相组分；(b)二维分离：取一维液相组分用40％乙醇‑正己烷溶液20～60℃超声溶解至浓度为60～100mg/ml，过膜后通过高压制备液相色谱进行分离，采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用A流动相为正己烷、B流动相为乙醇的二元流动相体系，进样量为1～4mL/针，流动相流速为12～16mL/min，洗脱方式为B相浓度5％等度洗脱，检测波长为210～280nm，根据紫外吸收光谱收集13.5‑14.5min洗脱液作为目的组分，经浓缩后真空冷冻干燥，得到本发明抗肿瘤活性组分。