[发明专利]水中浮游生活微型异养鞭毛虫的分离纯化方法在审
| 申请号： | 201510442345.7 | 申请日： | 2015-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN105062892A | 公开（公告）日： | 2015-11-18 |
| 发明（设计）人： | 蓝文陆;潘科 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区海洋环境监测中心站 |
| 主分类号： | C12N1/10 | 分类号： | C12N1/10 |
| 代理公司： | 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 45104 | 代理人： | 杨立华 |
| 地址： | 536000 广*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种水中浮游生活微型异养鞭毛虫的分离纯化方法，主要包括自制微量吸管、鞭毛虫样品的采集、鞭毛虫单体的分离和鞭毛虫单体的纯化等步骤。应用本发明从水体中分离纯化微型异养鞭毛虫，由于是在一个微液滴中确认鞭毛虫数量，所以辨认过程比较简单，通常鞭毛虫的形态表现为一个移动速度很快的小圆点，而本法的部分操作不需要在显微镜视野中进行，大大减少了折断毛细管的情况。同时，本发明的方法简便易学、分离速度快，为微型异养鞭毛虫的研究提供了有效可靠的技术支持。 | ||
| 搜索关键词： | 水中 浮游 生活 微型 鞭毛虫 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种水中浮游生活微型异养鞭毛虫的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)自制微量吸管将长嘴吸管的嘴部放在酒精灯上加热，待玻璃变红，迅速将吸管的末端受热位置均匀拉细成毛细管，即得微量吸管；(2)鞭毛虫样品的采集用广口瓶、大口三角烧瓶野外采集异养鞭毛虫水样，采集后用纱布包裹瓶口，带回实验室进行加富培养；(3)鞭毛虫单体的分离取少量的加富培养后的水样滴加适量在玻片一侧；在显微镜(100×)下，从玻片的另一侧找到一片空白区域并在镜头下确认该区域的位置；用自制微量吸管从水样中吸取微量液体小心滴在镜头下既定区域；立即在显微镜视野中找到该液滴，反复调节焦距，直至确认液滴中的鞭毛虫数量；如果液滴中只有一个鞭毛虫，那么迅速将微量吸管靠近液滴，利用吸管的毛细作用重新吸回液滴，然后将液滴转移到预先准备好的菌液中；如果液滴中有多个不同的鞭毛虫，则放弃该液滴，重复吸取液滴观察操作；(4)鞭毛虫单体的纯化将挑好的鞭毛虫个体放在20～25℃下培养，约3～4天后取样，在400倍和1000倍显微镜视野下观察，确认是否成功分离出纯种；如果分出的鞭毛虫不纯，可以进行第二次分离，直到分离到纯化种类为止。
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- 2014-08-27 - 2014-12-24 - C12N1/10
- 本发明公开了属于作物害虫生物防治领域的一种用于防治二点委夜蛾的家家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)ED2013，该微孢子虫已于2014年8月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.9557。本发明还公开了含有ED2013孢子的杀虫剂及其制备方法。本发明家蚕微孢子虫ED2013对二点委夜蛾幼虫具有较高杀虫活性，杀虫效果好，可有效地降低二点委夜蛾的种群数量，为防治二点委夜蛾提供了一种高效途径；其次，本发明属于生物防治方法，对环境无污染，对其他天敌无害，还可以替代或降低农药使用量，属于环境友好型。
- 一种体外快速增殖疟原虫成熟裂殖体的方法-201410186288.6
- 付雍;徐文岳;丁艳 - 中国人民解放军第三军医大学
- 2014-05-05 - 2014-07-16 - C12N1/10
- 本发明公开了一种体外快速增殖疟原虫成熟裂殖体的方法，具体步骤为：将液氮冻存的疟原虫解冻复苏，离心，沉淀用疟原虫培养基重悬后再用疟原虫培养基洗涤，离心收集沉淀，然后加入疟原虫培养基重悬，重悬后通入N2、CO2和O2的混合气体，再在37℃、100r/min的条件下过夜培养，培养液用体积分数为72％Percoll分离液进行梯度离心，离心完毕，取中间层液体，然后用疟原虫培养基清洗，离心收集沉淀，得疟原虫成熟裂殖体；该方法操作简单，不需要在小鼠体内增殖，并且获得的疟原虫成熟裂殖体的数量多，可达到107～108，能够满足转基因需求，为疟原虫功能基因组学研究奠定了基础。
- 一种鸡艾美耳球虫卵囊分离纯化的工业化生产方法-201410082352.6
- 吴彩艳;孙铭飞;戚南山;廖申权;吕敏娜;李娟;谢明权;温列娜 - 广东省农业科学院动物卫生研究所
- 2014-03-07 - 2014-06-25 - C12N1/10
- 本发明公开了一种鸡艾美耳球虫卵囊分离纯化的工业化生产方法。该方法通过采用碟片分离机和管式离心机的科学组合，对鸡艾美耳球虫卵囊进行分离纯化，孢子化卵囊纯化后，无较大杂质，且无极微小的杂质。玻片镜检极其干净，未孢子化卵囊也全部剔除干净，视野中均为孢子化卵囊，溶液背景清晰。本发明方法缩短了卵囊分离纯化时间，与传统技术相比，节省时间70%以上；整个卵囊纯化避免太多人为工作的干扰，减少了过多人为因素造成产品的不稳定，是目前球虫疫苗生产方法的突破；本方法只需两台离心机，便可连续生产，极大地降低企业的成本投入。
- 一种嗜热四膜虫的高密度发酵方法-201410024085.7
- 缪炜;钟秋萍;周志刚;袁冬霞;李青 - 中国科学院水生生物研究所;中国农业科学院饲料研究所
- 2014-01-20 - 2014-04-30 - C12N1/10
- 本发明公开了一种嗜热四膜虫的高密度发酵方法。本发明提供了一种培养四膜虫的方法，包括如下步骤：将四膜虫接种至pH5-9的发酵培养基，使四膜虫的初始密度为3125-50000cells/ml，然后采用50-200rpm转速培养10-96小时。本发明解决了四膜虫高密度发酵中两个迫在眉睫的问题，即培养基贵的问题和没有发酵工艺的问题，与现有技术相比其优点在于：⑴大大节省了成本，适合大批量培养四膜虫，为工业化生产四膜虫奠定了坚实的基础；⑵本发明在国内首次建立了发酵罐培养四膜虫的发酵工艺，并实现了四膜虫的高密度发酵，为四膜虫高密度生产产物奠定了坚实的基础。
- 氯胺B溶液在鸡球虫卵囊培养及保存中的应用-201310717171.1
- 戚南山;孙铭飞;廖申权;吴彩艳;吕敏娜;李娟;谢明权;温列娜 - 广东省农业科学院动物卫生研究所
- 2013-12-23 - 2014-04-09 - C12N1/10
- 本发明公开了氯胺B水溶液在鸡球虫卵囊培养及保存中的应用。本发明研究发现，利用氯胺B水溶液作为鸡球虫卵囊的培养液可以有效提高鸡球虫卵囊的孢子化率。且鸡柔嫩、堆型、巨型和毒害艾美耳球虫卵囊保存至6个月内，活力不受任何影响，8个月内卵囊产量降低25%以内，致病力均不受明显影响。因此，氯胺B水溶液可以取代重铬酸钾作为鸡球虫卵囊的培养和保存液。
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