本发明公开了一种根据牛无绿藻cob基因设计的PCR检测引物,其核苷酸序列如下:cob‑5‑F:CTAGTTATTCAAGTCCTCG;cob‑5‑R:AATTACTGTAGCACCCC,所述牛无绿藻cob基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,本发明还公开了所述的PCR检测引物在牛无绿藻非诊断目的检测中的应用。本发明通过对牛无绿藻cob基因的PCR引物进行筛选,得到一对灵敏度高且特异性强的引物,将该引物结合荧光定量PCR技术,能够直接对牛奶样品中的牛无绿藻进行定性以及定量测定,在早期快速诊断牛无绿藻性乳腺炎方面具有明显的优势。