[发明专利]α‑淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸有效
申请号: | 201280050716.1 | 申请日: | 2012-10-17 |
公开(公告)号: | CN103857794B | 公开(公告)日: | 2018-03-20 |
发明(设计)人: | C.安德森;S.E.拉森;E.P.弗里斯;P.K.汉森;H.弗里斯-马德森;A.维克索-尼尔森;P.O.米歇尔森 | 申请(专利权)人: | 诺维信公司 |
主分类号: | C12N9/28 | 分类号: | C12N9/28 |
代理公司: | 北京坤瑞律师事务所11494 | 代理人: | 史悦 |
地址: | 丹麦*** | 国省代码: | 暂无信息 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明涉及α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞;以及使用这些变体的方法。 | ||
搜索关键词: | 淀粉酶 变体 以及 编码 它们 多核苷酸 | ||
【主权项】:
一种α‑淀粉酶变体,该变体包括在对应于SEQ ID NO:1的位置176和位置185的位置处的下述取代:K176L+E185P,其中该变体与以下各项具有至少98%并且小于100%的序列一致性:(i)SEQ ID NO:14的成熟多肽,或(ii)SEQ ID NO:14的氨基酸1至481,并且其中该变体具有α‑淀粉酶活性。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于诺维信公司,未经诺维信公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201280050716.1/,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:履带式泥浆泵机组
- 下一篇:自认证信息防伪的方法
- 同类专利
- 一种耐碱性α-淀粉酶及其基因工程菌的构建方法和应用-201610498392.8
- 李松;汤斌;杨倩;魏胜华;陶玉贵;葛飞;朱龙宝;李婉珍 - 安徽工程大学
- 2016-06-30 - 2019-09-10 - C12N9/28
- 本发明公开了一种耐碱性α‑淀粉酶及其基因工程菌的构建方法和应用,属于酶工程领域。本发明采用基因工程技术将来源于碱性芽孢杆菌(Bacillus sp.LS‑04)的耐碱性α‑淀粉酶基因克隆入pPIC9k质粒,以P.pastoris为表达宿主细胞,经甲醇诱导重组耐碱性α‑淀粉酶表达活力达到3120U/mL。本发明的耐碱性α‑淀粉酶在pH8.0–11.0范围内对淀粉均变现出良好的催化活性,可被应用于纺织退浆或洗涤助剂等领域。
- 活性提高的α-淀粉酶AmyL突变体及其编码基因和应用-201710032308.8
- 李阳源;黄江;王建荣;聂金梅;陈丽芝;何小梅;杨玲;黄佳乐 - 广东溢多利生物科技股份有限公司
- 2017-01-16 - 2019-08-27 - C12N9/28
- 本发明涉及基因工程领域,具体涉及活性提高的α‑淀粉酶AmyL突变体及其编码基因和应用。突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的经过改良的α‑淀粉酶菌株在180小时的发酵酶活达到36900U/mL,比改造前的α‑淀粉酶生产菌提高41.5%。因此,本发明的突变α‑淀粉酶BsaAmy6及重组工程菌,大大降低了发酵生产成本,为其进一步工业化应用奠定基础。
- α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸-201780071649.4
- T.吉本斯;C.安德森;P.V.拉奥 - 诺维信公司
- 2017-11-29 - 2019-08-27 - C12N9/28
- 本发明涉及α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞;以及使用这些变体的方法。
- α-淀粉酶的制备方法-201610836135.0
- 刘秀霞;张伟;白仲虎;杨艳坤;李诗洁;王世杰 - 江南大学
- 2016-09-20 - 2019-07-16 - C12N9/28
- 本发明提供了α‑淀粉酶的制备方法,其能解决现有技术中通过枯草芽孢杆菌制备α‑淀粉酶后期纯化步骤繁琐、得到纯品不易的技术问题。其包括以下步骤:(2)在α‑淀粉酶基因上游添加e3 SD序列、下游添加组氨酸标签,获得改造后的α‑淀粉酶基因;(3)将改造后的α‑淀粉酶基因连接到载体pxmj19‑aph213上,获得重组表达载体pxmj19‑aph213‑amy;(4)将重组表达载体pxmj19‑aph213‑amy转入谷氨酸棒杆菌,获得重组菌;(5)培养重组菌,分泌表达α‑淀粉酶;(6)α‑淀粉酶的纯化,包括:将含有α‑淀粉酶的上清进行亲和层析,介质为镍柱。
- 一种突变的α-淀粉酶及其制备方法和应用-201610906457.8
- 葛文广;刘红厚;蒋北华;马彩霞 - 河北华石生物科技有限公司
- 2016-10-18 - 2019-06-28 - C12N9/28
- 本发明属于生物工程领域,具体涉及一种突变的α‑淀粉酶及其制备方法和应用。本发明所提供的突变的α淀粉酶的耐高温氨基酸序列,氨基酸序列在野生型火球菌α‑淀粉酶氨基酸序列基础上,有下列一个或多个位点的氨基酸被其它氨基酸所替换,被替换的氨基酸位点为:W65、C204、N366,突变后的PFAMY基因在大肠杆菌中表达量达到了10000u/l,比之前的野生型的酶活有了大幅的提高;突变后的PFAMY热稳定性增加,由原来的最适温度90℃变为100℃,热稳定性更强,酶活更稳定,具有更好的工业应用前景。
- 一类热稳定性提高的淀粉酶突变体及其编码基因和应用-201510446883.3
- 龙丽娟;杨键;李丽珍;李洁;肖运柱;齐振雄;尹团;张偲 - 中国科学院南海海洋研究所
- 2015-07-27 - 2019-05-17 - C12N9/28
- 本发明公开了一类热稳定性提高的淀粉酶突变体及其编码基因和应用。本发明从一种深海热泉来源的细菌α‑淀粉酶AMY121出发,运用定点饱和突变技术获得热稳定性提高的淀粉酶突变体;所述的深海热泉细菌α‑淀粉酶AMY121具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸残基序列,筛选得到的淀粉酶突变体Y187E、K205L和Y187E/K205L的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。以各自的最适作用温度,T5015及75℃下的半衰期t1/2为衡量标准,相较于野生型淀粉酶,淀粉酶突变体的热稳定性得到提高;扩展了深海热泉细菌淀粉酶AMY121的应用范围。
- L型α淀粉酶变体及其生产方法-201610817210.9
- 范岩;杜秀贞;郝名慧;卢嫣红;孙燕;徐红 - 南京百斯杰生物工程有限公司
- 2016-09-12 - 2019-05-03 - C12N9/28
- 本发明公开了L型α淀粉酶变体及其生产方法。所述的α淀粉酶变体由亲代α淀粉酶氨基酸序列中至少有一个氨基酸残基突变、增加或删除得到,同时仍然保持了亲代水解α‑1,4糖苷键的能力的α淀粉酶;二者氨基酸序列同源性达到95%以上;优选如SEQ ID NO.4所示的α淀粉酶变体。本发明提供的一系列α淀粉酶变体,在pH 5.0‑5.8酸性条件下和100℃以上高温条件下有较高的催化活度。这些α淀粉酶变体的耐酸和热稳定性,适用于淀粉液化。
- α淀粉酶变体及其应用-201610816934.1
- 范岩;杜秀贞;郝名慧;卢嫣红;孙燕;徐红;李峰 - 南京百斯杰生物工程有限公司
- 2016-09-12 - 2019-05-03 - C12N9/28
- 本发明公开了α淀粉酶变体及其应用。所述的α淀粉酶变体通过在B.licheniformis的α淀粉酶N端增加两个额外的氨基酸A和N,并且在C端增加五个额外的氨基酸KTTVS得到,同时仍然保持了亲代水解α‑1,4糖苷键的能力;优选如SEQ ID NO.4所示的α淀粉酶变体。本发明提供的一系列α淀粉酶变体,在pH 5.0‑5.8酸性条件下和100℃以上高温条件下有较高的催化活度。这些α淀粉酶变体的耐酸和热稳定性,适用于淀粉液化。
- 一种地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶突变体及其应用-201610238772.8
- 韦宇拓;汤宏赤;刘明瑞;杜丽琴 - 广西大学
- 2016-04-18 - 2019-04-16 - C12N9/28
- 一种地衣芽胞杆菌高温α‑淀粉酶突变体及其应用,所述高温α‑淀粉酶突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。该突变体是通过对来自地衣芽胞杆菌高温α‑淀粉酶进行蛋白质工程的改造和筛选得到,该突变体酶在水解淀粉中的应用,使水解淀粉的产物中葡萄糖含量得到提高,降低糊精和寡糖的含量,单独水解淀粉得到的糖浆中葡萄糖含量在72%,能减少后续进一步生产葡萄糖中糖化酶的使用,有利于降低生产成本。
- 一种纯化固定化重组α-淀粉酶的方法-201810896417.9
- 周志江;赵芳坤;杜仁鹏;韩烨;宋巧智;曹硕;肖华志 - 天津大学
- 2018-08-08 - 2018-12-18 - C12N9/28
- 本发明公开了一种纯化固定化重组α‑淀粉酶的方法,构建α‑淀粉酶‑AcmA融合蛋白重组表达载体,α‑淀粉酶与AcmA锚定区之间添加柔性蛋白Linker,诱导表达后利用GEM(革兰氏阳性基质)进行纯化固定化。该方法能够将重组α‑淀粉酶的纯化与固定化结合,减少纯化固定化过程中的步骤,通过该方法固定化的酶,具有很好的酶活和蛋白回收率,同时在长时间保存中能够维持酶活。这种方法能够简化纯化和固定化操作,降低酶活损失。
- 具有高比活及热稳定性的淀粉酶突变体及其基因和应用-201810812153.4
- 姚斌;罗会颖;邱锦;涂涛;黄火清;王苑;王亚茹;柏映国;苏小运;孟昆 - 中国农业科学院饲料研究所
- 2018-07-23 - 2018-11-20 - C12N9/28
- 本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及具有高比活及热稳定性的淀粉酶突变体及其基因和应用。通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的野生型淀粉酶进行S33A/S34E/V35H点突变,并去除178和179位氨基酸,从而获得所述淀粉酶突变体。本发明的淀粉酶突变体与野生型淀粉酶相比,具有如下性状:1)淀粉酶酶活性增强;2)淀粉酶热稳定性增强。
- 一种提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法-201510723558.7
- 孙俊良;梁新红;胡梁斌;王田林;张永帅;张万利 - 河南科技学院
- 2015-10-29 - 2018-10-12 - C12N9/28
- 一种提高中温ɑ‑淀粉酶的酶活的方法,它包括以下步骤:①将占发酵液总重量2%的枯草芽孢杆菌种子液接种到装有2.5L发酵液的发酵罐中;②再控制通气量,其通气量为:按照发酵液体积与空气体积的比例进行设置,在0~10h为1:0.4,在10‑18h为1:0.8,在18h~发酵结束时为1:1.1;③在发酵过程中进行补料,补料培养基按照重量百分比为:麦芽糊精27.50%,豆饼粉8.75%,Na2HPO4·12H2O 1.25%,(NH4)2SO4 0.5%,(NH4)2Cl 0.19%,CaCl2 0.25%,其余为水,每次补料20mL,整个培养过程为51h‑56h。本发明的方法制备工艺简单、方便易行,无需增加特殊设备,成本低。
- α‑淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸-201280050716.1
- C.安德森;S.E.拉森;E.P.弗里斯;P.K.汉森;H.弗里斯-马德森;A.维克索-尼尔森;P.O.米歇尔森 - 诺维信公司
- 2012-10-17 - 2018-03-20 - C12N9/28
- 本发明涉及α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞;以及使用这些变体的方法。
- α‑淀粉酶变体和编码该变体的多核苷酸-201180012225.3
- C.安德森;R.戴恩哈默;T.A.波尔森;M.D.托斯卡诺;P.K.汉森;H.弗里斯-马德森;A.维克索尼尔森;S.E.拉森;L.L.H.克里斯滕森 - 诺维信公司;诺维信北美公司
- 2011-01-04 - 2018-03-20 - C12N9/28
- 本发明涉及亲本α‑淀粉酶的变体。本发明还涉及编码该变体的多核苷酸和包含该多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞以及使用该变体酶的方法。
- α‑淀粉酶变体以及编码它们的多核苷酸-201680026191.6
- C.安德森;V.斯里瓦斯塔瓦;P.巴卢穆里;P.P.查克拉巴尔蒂;S.达拉尔 - 诺维信公司
- 2016-05-09 - 2018-03-02 - C12N9/28
- 本发明涉及α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞;以及使用这些变体的方法。
- 一种新型α‑淀粉酶及其应用-201510205474.4
- 王岩;张晓华;宋庆浩 - 中国海洋大学
- 2015-04-25 - 2017-11-10 - C12N9/28
- 本发明的目的是提供一种新型α‑淀粉酶,其氨基酸序列为SEQ ID NO1,编码上述α‑淀粉酶的基因,其一种核苷酸序列为SEQ ID NO2。本发明的α‑淀粉酶具有更宽的温度耐受范围,50℃下测得酶比活力高达5776U/mg,而其在低温10℃下仍能保持38%左右的活性。
- 脂环酸芽孢杆菌变体以及编码它们的多核苷酸-201580059787.1
- C.安德森;I.达玛格;A.芒克;T.霍夫 - 诺维信公司
- 2015-11-20 - 2017-08-18 - C12N9/28
- 本发明涉及α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞;以及使用这些变体的方法。
- 来自枯草芽孢杆菌的变体α‑淀粉酶及其使用方法-200980129863.6
- R·金;W·A·奎瓦斯;D·A·埃斯特尔;S-K·李;M·J·佩珀森;S·D·鲍尔;S·W·拉默;C·A·里夸德特;A·肖;A·R·托波扎达;L·华莱士 - 丹尼斯科美国公司
- 2009-06-05 - 2017-06-09 - C12N9/28
- 本发明提供来自枯草芽孢杆菌的α‑淀粉酶(AmyE)、其变体、编码其的核酸、和包括该核酸的宿主细胞。公开使用AmyE或其变体的方法,包括淀粉的液化和/或糖化。这些方法可以产生对于乙醇生产或高果糖玉米糖浆生产有用的糖。在某些情况下,该淀粉酶可以在低pH、在缺乏钙的情况下和/或在缺乏葡糖淀粉酶的情况下使用。
- 氧化稳定的α‑淀粉酶变体-201580030895.6
- C.安德森;A.D.霍格;S.E.拉森;A.法拉赫-阿拉吉 - 诺维信公司
- 2015-06-12 - 2017-05-10 - C12N9/28
- 本发明涉及氧化稳定的α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞;以及使用这些变体的方法。
- 淀粉酶变体-201580034095.1
- S·耶内维因;S·尼德迈尔 - 巴斯夫欧洲公司
- 2015-04-15 - 2017-05-10 - C12N9/28
- 本发明涉及淀粉酶领域,特别是α‑淀粉酶,以及包含该淀粉酶的组合物。本发明还描述了用于生产该淀粉酶的手段和方法、以及淀粉酶和含淀粉酶组合物的用途,例如用于清洁含淀粉污渍、纺织品脱浆、淀粉液化和糖化、烘焙和酿造。本发明还公开了用于在发酵、淀粉酶或含淀粉酶制剂的配制和储存期间增加淀粉酶纯度的手段。
- 一种耐高温α‑淀粉酶及其制备方法和应用-201510004498.3
- 刘逸寒;王正祥;路福平;王春霞;王建玲 - 天津科技大学
- 2015-01-06 - 2017-03-15 - C12N9/28
- 本发明涉及一种新型的耐高温α‑淀粉酶及其基因和制备方法,通过PCR定点突变野生型耐高温α‑淀粉酶基因,并使其在枯草芽孢杆菌中高效表达。本发明的新型的耐高温α‑淀粉酶在高温和酸性环境下稳定性高,能够更好的适应工业生产,以达到节能减耗,提高效率的作用。其技术方案是从地衣芽孢杆菌中分离野生型耐高温α‑淀粉酶基因,对其His316的氨基酸残基进行突变,经在枯草芽孢杆菌中高效表达,在90℃和pH4.5的条件下,该新型的耐高温α‑淀粉酶(His316→Arg)比野生型的耐高温α‑淀粉酶稳定性均有提高。
- 一种高温活性和热稳定性提高的α‑淀粉酶突变体ApkA‑m及其制备方法和应用-201510686340.9
- 曾静;袁林;郭建军;郭浩;王林庚 - 江西省科学院微生物研究所;江西鑫维生物技术有限公司
- 2015-10-20 - 2017-03-08 - C12N9/28
- 本发明公开了一种高温活性和热稳定性提高的α‑淀粉酶突变体ApkA‑m及其制备方法和应用。本发明公开了一种高温活性和热稳定性提高的α‑淀粉酶及其编码基因,以来源于极端嗜热古生菌Thermococcus kodakarensis KOD1的α‑淀粉酶ApkA为母本,采用分子生物学技术对ApkA的氨基酸序列进行定点突变,选择的突变位点为K152H和A166C。在此改造条件下,α‑淀粉酶ApkA突变体的最适反应温度由对照(突变前)的90℃提高到100℃;于110℃绝对酶活由对照(突变前)的566.03U/mg提高至4463.67U/mg,提高了7.89倍;于100℃半衰期由对照(突变前)的7.5min延长至80min,提高了10.67倍。
- 一种麦芽糖淀粉酶的突变体及其制备方法-201510025813.0
- 吴敬;段绪果;孙烨橙;王蕾 - 江南大学
- 2015-01-19 - 2017-02-22 - C12N9/28
- 一种麦芽糖淀粉酶的突变体及其制备方法,属于基因工程和酶工程领域。是将嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)来源的麦芽糖淀粉酶转苷活性中心的氨基酸残基的取代,与其亲代的麦芽糖淀粉酶相比,其对麦芽糖具有更高的转化效率以及更少的转化副产物。所述B.stearothermophilus麦芽糖淀粉酶突变体,至少以下性质之一发生改变1)生产周期缩短;2)产物比例提高。这些突变体比野生型麦芽糖淀粉酶更适合用于麦芽糖生产过程。
- 一种热稳定性提高的淀粉酶突变体及其制备方法和应用-201410461796.0
- 陈坚;刘龙;邓壮梅;堵国成;杨海泉 - 江南大学
- 2013-09-17 - 2017-02-15 - C12N9/28
- 本发明公开了一种热稳定性提高的淀粉酶突变体及其制备方法和应用,属于酶工程领域。本发明利用分子生物学技术进行多轮定点突变获得了热稳定性提高的淀粉酶突变体,所得淀粉酶在60℃的半衰期由对照(突变前)例的3.2min提高到23.9min。利用此策略可以显著提高淀粉酶的热稳定性,为其工业化生产提供了基础。此策略对其它酶的性质改造具有重要的指导意义。
- α‑淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸-201580029823.X
- C.安德森;C.加迪亚拉姆;R.K.萨伊纳坦;P.巴卢穆里;P.V.伊耶;I.达马杰;A.蒙克;S.克里希纳 - 诺维信公司
- 2015-06-12 - 2017-02-15 - C12N9/28
- 本发明涉及具有α‑淀粉酶活性的变体和编码这些变体的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞,包含这些变体的组合物,以及产生和使用这些变体的方法。
- 淀粉酶多肽-201080021717.4
- K·M·克劳;A·H·凯利特-史密斯;R·米科尔森;R·梅吉达尔;R·L·B·詹纳 - 杜邦营养生物科学有限公司
- 2010-05-19 - 2016-11-16 - C12N9/28
- 本发明涉及多肽,更具体地为淀粉酶多肽和编码它们的核酸,以及它们的用途,例如在食品或饲料产品生产中作为非麦芽生成性外切淀粉酶。
- α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸-201480068977.5
- C.安德森 - 诺维信公司
- 2014-12-19 - 2016-08-03 - C12N9/28
- 本发明涉及具有α‑淀粉酶活性的变体和编码这些变体的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞,以及产生和使用这些变体的方法。
- 一种耐高温淀粉酶、其编码基因及其应用-201410712820.3
- 张元兴;蔡孟浩;周祥山;蒋涛;黄猛猛 - 华东理工大学
- 2014-11-28 - 2016-06-22 - C12N9/28
- 本发明涉及一种耐高温淀粉酶、其编码基因及其应用。首次分离获得一种来源于深海海洋嗜热细菌(Geobacillus sp.4j)的耐高温α-淀粉酶,其具有酶活性高且热稳定性高的特点。
- α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸-201480053474.0
- C.安德森;C.加迪亚拉姆;R.K.赛内森;P.巴卢缪里 - 诺维信公司
- 2014-09-30 - 2016-05-11 - C12N9/28
- 本发明涉及具有α-淀粉酶活性的变体和编码这些变体的多核苷酸。本发明还涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些变体的方法。
- 具有淀粉酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸-201480034508.1
- I.达马格;T.霍夫;A.芒奇 - 诺维信公司
- 2014-06-23 - 2016-02-10 - C12N9/28
- 本发明涉及具有α-淀粉酶活性的分离的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。
- 专利分类