[发明专利]人源胰凝乳蛋白酶的表达及纯化无效
| 申请号： | 201010231264.X | 申请日： | 2010-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN101914557A | 公开（公告）日： | 2010-12-15 |
| 发明（设计）人： | 杨福愉;赵凯;卫涛涛 | 申请（专利权）人： | 中国科学院生物物理研究所 |
| 主分类号： | C12N15/59 | 分类号： | C12N15/59;C12N15/70;C12N9/76 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 陈长会 |
| 地址： | 100101*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种人源胰凝乳蛋白酶的分离纯化方法，其特征在于所述人源胰凝乳蛋白酶原的激活和标签的去除在一步完成，不引入肠激酶，而是只使用胰蛋白酶，其包括以下步骤：a)获得人源胰凝乳蛋白酶原编码序列；b)将上述获得的人源胰凝乳蛋白酶原编码序列引入原核表达系统中，得到重组质粒；c)将上述得到的重组质粒转化细胞质二硫化物还原系统的两个突变的宿主菌株进行人源重组胰凝乳蛋白酶原的表达纯化；d)将上述纯化的胰凝乳蛋白酶原与胰蛋白酶混合以激活酶原。该发明在酶原激活的同时完成了增溶标签的去除，避免了昂贵的肠激酶的使用，同时可获得几乎不含多余氨基酸的重组蛋白。生产成本的降低无疑给该工作带来了广阔的工业应用前景。本发明纯化所得的胰凝乳蛋白酶表达量高，纯度好，成本低，可以有效地用于治疗及化学领域。 | ||
| 搜索关键词： | 人源胰 凝乳 蛋白酶 表达 纯化 | ||
【主权项】：
一种人源胰凝乳蛋白酶的分离纯化方法，其特征在于所述人源胰凝乳蛋白酶原的激活和标签的去除在一步完成，不引入肠激酶，而是只使用胰蛋白酶，其包括以下步骤：a)获得人源胰凝乳蛋白酶原编码序列；b)将上述获得的人源胰凝乳蛋白酶原编码序列引入原核表达系统中，得到重组质粒；c)将上述得到的重组质粒转化细胞质二硫化物还原系统的两个突变的宿主菌株进行人源重组胰凝乳蛋白酶原的表达纯化；d)将上述纯化的胰凝乳蛋白酶原与胰蛋白酶混合以激活酶原。
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- 本发明提供一种人源胰凝乳蛋白酶的分离纯化方法，其特征在于所述人源胰凝乳蛋白酶原的激活和标签的去除在一步完成，不引入肠激酶，而是只使用胰蛋白酶，其包括以下步骤：a)获得人源胰凝乳蛋白酶原编码序列；b)将上述获得的人源胰凝乳蛋白酶原编码序列引入原核表达系统中，得到重组质粒；c)将上述得到的重组质粒转化细胞质二硫化物还原系统的两个突变的宿主菌株进行人源重组胰凝乳蛋白酶原的表达纯化；d)将上述纯化的胰凝乳蛋白酶原与胰蛋白酶混合以激活酶原。该发明在酶原激活的同时完成了增溶标签的去除，避免了昂贵的肠激酶的使用，同时可获得几乎不含多余氨基酸的重组蛋白。生产成本的降低无疑给该工作带来了广阔的工业应用前景。本发明纯化所得的胰凝乳蛋白酶表达量高，纯度好，成本低，可以有效地用于治疗及化学领域。
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