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[发明专利]一种富集、鉴定待测病样中分子标志物的方法-CN202110361337.5有效
发明人： 顾宏周;胡沁沁;佟宗轩;江一舟;邵志敏;刘西禹;葛丽萍;傅彤 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2021-04-02 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用脱氧核酶探针对待测病样中分子标志物的鉴定方法，该方法利用脱氧核酶探针与分子标志物之间的相互作用，结合蛋白纯化技术和磁分离技术，对某一组分中的分子标志物进行特异性地捕获、富集，再通过互补的置换链将目标蛋白洗脱，做后续的身份鉴定。针对三阴性乳腺癌(TNBC)以及其他任何未明确标志物的疾病模型，研究人员都可运用本发明所述方法简单、快速地鉴定出标志物。因此，针对未知靶标分子的研究对象，本发明提供了一种基于“探针富集，探针检测”的简单、快速明确标志物的新方法。
一种富集鉴定待测病样中分子标志方法

[发明专利]一种长单链DNA的制备方法-CN201910989379.6有效
发明人： 顾宏周;张俏;夏凯 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2019-10-17 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种借助I类和II类水解性脱氧核酶高效制备长单链DNA的方法。该方法主要包括设计并构建重组噬菌粒，获得噬菌粒环状单链DNA步骤，同时采用I类脱氧核酶和II类脱氧核酶突变体切割环状单链DNA，纯化回收酶切得到的所述长单链DNA。利用这两类能快速水解DNA的脱氧核酶，可代替限制性内切酶，低成本的实现对辅助噬菌体法制备出的DNA序列的特异性切割，大量、经济、高纯度制备任意长度和序列的单链DNA。
一种长单链 dna 制备方法

[发明专利]一种基于等位基因敲入的微管标记方法、及其标记的真核细胞和应用-CN202310017541.4在审
发明人： 顾宏周;夏凯;张灿钰;周末;陈黎曼 -专利权人：上海前瞻创新研究院有限公司
申请日： 2023-01-06 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供基于等位基因敲入的微管蛋白标记方法，包括以下步骤：(1)提供针对真核细胞TUBA1B基因的CRISPR/Cas9靶向切割系统；(2)提供两条针对该真核细胞TUBA1B基因的单链DNA(ssDNA)同源修复模板；(3)将CRISPR/Cas9靶向切割系统和两条ssDNA同源修复模板按比例转染到真核细胞中，得到同源重组了该标记蛋白基因的真核细胞；以及(4)向转染细胞中添加两种抗生素进行筛选，筛选后获得该等位基因敲入的微管蛋白标记的阳性真核细胞；还提供了该方法标记了微管蛋白的真核细胞。本发明的标记方法可真实地反应细胞内微管蛋白最自然的表达和分布情况，可实现活细胞、长时间、长细胞代数、稳定的原位微管蛋白示踪。且能降低背景干扰，保证不同实验结果之间的一致性。
一种基于等位基因微管标记方法及其真核细胞应用

[发明专利]一种种植体材料的制备方法及其应用-CN202211535656.4在审
发明人：钱程辉;刘月华;顾宏周;陈思;陈黎曼 -专利权人：上海市口腔医院（上海市口腔健康中心）
申请日： 2022-12-02 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C07F7/28 文献下载
摘要：本发明提供了一种种植体材料的制备方法及其应用，属于生物技术领域。所述制备方法包括：将钛材料进行预处理；采用预处理后的所述钛材料制备羟基化钛材料；采用所述羟基化钛材料制备硅烷化钛材料，得到所述种植体材料。获得的种植体材料具有良好的生物相容性。
一种种植材料制备方法及其应用

[发明专利]能快速水解DNA的II类脱氧核酶突变体-CN201910989374.3有效
发明人： 顾宏周;张俏 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2019-10-17 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了多个感应锌离子并能快速水解DNA的II类脱氧核酶突变体，II‑R1a，II‑R1b，II‑R1c，II‑R1d，所述突变体是基于II类脱氧核酶II‑R1的序列，设计“退化”的DNA文库，利用指数富集的配体系统进化技术，体外筛选分离获得的切割位点处碱基分别为G、A、T、C时，水解DNA活性强的II类脱氧核酶突变体。本发明的II类脱氧核酶突变体II‑R1a在50℃下切割反应速率最快，反应1小时切割效率可达80％。
快速水解 dna ii 脱氧突变体

[发明专利]一种筛选紧密结合过渡态金属离子的方法-CN202310091652.X在审
发明人： 顾宏周;周末;许田斌 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2023-02-01 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种筛选紧密结合过渡态金属离子的方法。还公开了通过所述方法筛选获得的两类结合锌离子的DNA，和一类结合镉离子的DNA。将序列优化截短，得到了结合锌离子的Zn(II)‑MZ1a和Zn(II)‑MZ2a，以及结合镉离子的Cd(II)‑TX1a。Zn(II)‑MZ1a在37℃下1小时内，可以结合大量锌离子，并在变性丙烯酰胺凝胶(dPAGE)上显示63％的条带迁移。Zn(II)‑MZ2a在37℃下1小时内，可以结合大量锌离子，并在dPAGE显示53％的条带迁移。Cd(II)‑TX1a在37℃下1小时内，可以结合大量镉离子，并在dPAGE胶上显示56％的条带迁移。
一种筛选紧密结合过渡金属离子方法

[发明专利]一种种植体材料及其应用-CN202211535866.3在审
发明人：钱程辉;刘月华;顾宏周;陈思;陈黎曼 -专利权人：上海市口腔医院（上海市口腔健康中心）
申请日： 2022-12-02 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C07F7/28 文献下载
摘要：本发明提供了一种种植体材料，属于生物技术领域。所述种植体材料为钛‑硅基‑炔基，所述种植体材料的分子式为：C12H21NO7SiTi3。该种植体材料具有良好的生物相容性。
一种种植材料及其应用

[发明专利]IV类脱氧核酶突变体及其制备方法与应用-CN202011118638.7有效
发明人： 顾宏周;张灿钰;李青婷 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2020-10-19 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明提供了一种能够快速水解DNA的脱氧核酶。本发明通过引入特殊末端结构，设计了成环效率较高的DNA文库，进行筛选感应锌离子切割的实验，体外筛选到了另外的IV类脱氧核酶。设计相应的退化库，进行退化再筛选，从而获得快速水解切割DNA的IV脱氧核酶的突变体，从而满足不同DNA水解反应的需求。
iv 脱氧突变体及其制备方法应用

[发明专利]一种利用单链DNA纳米结构辅助分选脂质体的方法-CN202010773498.0有效
发明人： 顾宏周;陈黎曼 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2020-08-04 - 公布日： 2022-07-19 - 主分类号： A61K9/127 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用单链DNA纳米结构辅助分选脂质体的方法，该方法利用胆固醇修饰的单链DNA纳米结构，将其与脂质体连接形成这脂质体复合体，通过碘克沙醇梯度密度离心分出不同的组分，在不同的组分中最终得到大小均一的脂质体库。同时，本发明还提供了一种脂质体复合体，利用该复合体可以有效的进行脂质体不同大小的分选。本发明中ssDNs辅助分选技术容易产生平均直径约为40‑140nm的脂质体，从而为系统探索与ssDNs包覆的脂质体被活细胞吸收有关的大小和形状提供了一个有吸引力的平台。
一种利用 dna 纳米结构辅助分选脂质体方法

[发明专利]提高单链DNA连接效率的方法-CN202011011345.9有效
发明人： 顾宏周;李青婷 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2020-09-23 - 公布日： 2022-04-01 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高单链DNA连接效率的方法，在单链DNA的5’‑磷酸基末端和单链DNA的3’羟基末端设计二级结构，该二级结构通过末端核苷酸序列的互补配对的方式，将需要连接的单链DNA的5'‑PO4与3'‑OH之间的距离拉近，从而提高长片段DNA的成环效率及两个片段的连接效率。
提高 dna 连接效率方法

[发明专利]一种检测硫胺素焦磷酸的RNA传感器及其应用-CN201810077122.9有效
发明人： 顾宏周;杜鑫雨;钟春玖;程小芹 -专利权人：复旦大学附属中山医院
申请日： 2018-01-26 - 公布日： 2022-02-18 - 主分类号： C12N15/115 文献下载
摘要：本发明公开一种检测硫胺素焦磷酸的RNA传感器，包括特异感应硫胺素焦磷酸的RNA适配体、连接段RNA和锤头状核酶，其中RNA适配体通过连接段RNA与锤头状核酶连接，当RNA适配体感应到硫胺素焦磷酸时，触发锤头状核酶的自剪切；本发明还公开了一种包含本发明RNA传感器的试剂盒及检测硫胺素焦磷酸的方法；本发明的RNA传感器检测硫胺素焦磷酸灵敏度高、能够对硫胺素焦磷酸进行定性和定量检测。
一种检测硫胺素磷酸 rna 传感器及其应用

[发明专利]特异性识别结肠低级别上皮内瘤变适配体探针及应用-CN202111198079.X在审
发明人：时强;阿依木克地斯·亚力孔;钟芸诗;顾宏周;孙迪;周平红 -专利权人：复旦大学附属中山医院
申请日： 2021-10-14 - 公布日： 2021-12-10 - 主分类号： C12N15/115 文献下载
摘要：本发明涉及一种特异性识别结肠低级别上皮内瘤变适配体探针及应用，属于生物医药技术领域。通过本发明获得一种特异性识别结肠低级别上皮内瘤变适配体，适配体序列为SEQ ID NO.1；适配体是通过一段随机DNA序列将中间一部分碱基随机化，构建一个随机DNA文库，然后利用指数富集的配体系统进化技术筛选得到。本发明核酸适配体能特异识别结肠息肉低级别上皮内瘤变组织，可以成为诊断结肠低级别上皮内瘤变的分子探针，简化了实验方法，降低了检测成本，在临床医学与基础医学的肿瘤研究相关领域中具有广泛的应用价值和广阔的市场前景。
特异性识别结肠级别上皮内瘤变适配体探针应用

[发明专利]检测肝肿瘤组织豪猪音配体的方法-CN202010479956.X在审
发明人：吴健;李慧妍;顾宏周;樊春海;刘妍君;王丽华;尹芳菲;杜洋 -专利权人：复旦大学
申请日： 2020-05-29 - 公布日： 2021-12-03 - 主分类号： G01N33/574 文献下载
摘要：本发明属生物医药技术领域，涉及检测肝肿瘤组织豪猪音配体的方法，具体涉及基于适配体生物传感技术检测肝肿瘤组织豪猪音配体的方法，本方法包括豪猪音配体的DNA适配体的筛选，建立基于适配体高灵敏特异方法以及微芯片技术检测豪猪音配体。本方法测定肝癌组织中SHh的阳性率与特异性与用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果相当，与癌旁组织的差异显著，其检测特异性和阳性率高，与ELISA相比，方法简单、耗时缩短、操作简便、批次重复性好，结合微流控装置可建成实时检测装置。本发明为监测药物敏感性和进展、预测包括HCC在内的恶性肿瘤的预后提供了手段。
检测肿瘤组织豪猪音配体方法

[发明专利]差异筛选特异感应三阴性乳腺癌的脱氧核酶探针-CN202110364792.0在审
发明人： 顾宏周;胡沁沁;佟宗轩;江一舟;邵志敏;刘西禹;葛丽萍;傅彤 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2021-04-02 - 公布日： 2021-06-29 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种特异感应三阴性乳腺癌的脱氧核酶探针及筛选方法。本发明通过“对冲抵消”的差异筛选策略，在目标分子未知的情况下，获得了特异感应TNBC细胞系MDA‑MB‑231胞外代谢物的脱氧核酶探针。该探针具有识别速度快、特异性好的特点，为后续开发三阴性乳腺癌快速诊断提供新思路。
差异筛选特异感应阴性乳腺癌脱氧探针

[发明专利]III类脱氧核酶突变体及其制备方法与应用-CN202011120065.1在审
发明人： 顾宏周;张灿钰;李青婷 -专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
申请日： 2020-10-19 - 公布日： 2021-02-02 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了一种能够快速水解DNA的脱氧核酶。本发明通过引入特殊末端结构，设计了成环效率较高的DNA文库，进行筛选感应锌离子切割的实验，体外筛选到了另外一类III类脱氧核酶。设计相应的退化库，进行退化再筛选，从而获得快速水解切割DNA的III类脱氧核酶的突变体，从而满足不同DNA水解反应的需求，获得了能够感应锌离子并能快速水解DNA磷酸二酯键的III类脱氧核酶。
iii 脱氧突变体及其制备方法应用

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