[发明专利]泌尿系统真菌感染检测体系及其试剂盒和应用

说明书

本发明涉及一种泌尿系统真菌感染检测体系及其试剂盒和应用，检测体系共有5对引物，其中包括3对检测引物和1对人DNA内参引物，1对系统质控内参引物。本发明的泌尿系统真菌感染检测体系及其试剂盒和应用不需要采用常规检测，可在同一反应体系内直接对尿液样本进行多种病原体的同步鉴定和定量分析，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、快速准确的优势，第一时间为临床提供全面、精准、低成本的病原学诊断，为个体化用药和精准医疗提供重要参考。

技术领域

本发明涉及一种多重基因检测产品以及该产品所用到的检测体系，属于生物技术领域。

背景技术

泌尿系统感染又称尿路感染(Urinary Tract Infections,UTI)，是临床上最常见的感染性疾病之一。多种病原体可侵入泌尿系统并大量生长繁殖，引起尿频、尿急、尿痛、排尿困难和腰腿酸痛等临床症状，严重者可发展为脓毒血症和急慢性肾功能损害等重症疾病；而尿源性脓毒症及脓毒性休克进展极快，病死率高达28.3％～41.1％。国外UTI约占院内感染的40％，高居首位；而我国UTI的发生率也高达20.8％～31.7％，仅次于呼吸道感染，超过50％的女性一生中至少经历一次UTI。研究发现，女性、年龄大、住院时间长、糖尿病史、外科手术侵入操作、导尿管留置时间长、使用抗菌药物种类等多种因素是诱发院内UTI的独立危险因素，这也是近年来医源性UTI不断增多的主要原因。同时，经验性用药和抗菌药物的滥用导致UTI病原菌的耐药性日益增强。此外，在相当多的UTI患者中，感染在短期内会复发多次。综上，UTI的高发生率、高耐药率和高复发率给患者带来巨大痛苦，给社会公共卫生系统带来了沉重的治疗与经济负担，甚至危及患者生命。

引起UTI的病原体种类繁多，尿样本中常分离到的病原菌依次为大肠埃希菌、屎肠球菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、奇异变形杆菌和无乳链球菌等。UTI感染以单一菌种为主，近些年两种以上细菌混合感染、以及合并厌氧菌、真菌或其他非经典微生物感染的复杂性UTI的发生日趋严重。值得注意的是，相当一部分UTI病原体如结核分枝感染、淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体等难以培养和鉴定。以泌尿系统结核(urinary tuberculosis,UTB)为例，其发病率约占全部结核病的4％，在肺外结核占比高达30％～40％，是肺外结核中最为严重的临床类型，但这些病原体漏检率极高，易造成假阴性和误诊。综上，UTB病原体的繁多与复杂导致其诊断难度加大、延误治疗、甚至引起严重的临床并发症。所以，快速、准确和全面的病原体检测是诊断和控制UTB的关键。

UTI发病率高，易反复感染，病程迁延，严重危害患者的健康及生活质量。早期快速、准确的病原学诊断对于治疗UTI至关重要。但是国内外UTI相关病原体和耐药检测的常规方法均不能满足临床精准诊疗的需求。目前常用的检测方法包括：1)培养鉴定：细菌或真菌培养是UTI相关病原体检测的金标准。该方法特异性高，可直接为临床提供明确的病原学诊断和体外药敏试验结果。但是培养鉴定存在许多不足：①耗时长：普通细菌培养孵育需要经过16～24h，对于生长缓慢且营养需求复杂的病原体甚至需要更长的时间；菌落生长后还需进行生化鉴定和药敏试验，至少需要3个工作日；②覆盖面不全，阳性检出率低：由于普通培养多针对单一病原体，而UTI中还有结核分枝杆菌、支原体等难培养但又极为重要的致病菌，常导致假阴性。2)免疫学方法：临床可采用胶体金、血清学等方法，快速检测尿样本中特定的病原体。但该方法检测谱窄，无法同步检测混合感染。3)分子生物学方法：近年来国内外部分微生物实验室采用荧光定量PCR法(RT-PCR)，通过检测UTI常见病原体的特异性基因片段进行病原体的快速鉴定，可以大大提高阳性检出率。但是RT-PCR每次仅可检出一种特定的病原体或条件病原体，而无法同时检测/鉴定UTI相关的多种病原体。同时，该方法成本较高，每种病原体的PCR检测收费均在100元左右，单次20种临床最常见的UTI病原体全面检测费用至少需要1200元。2017年3月，欧洲泌尿外科学会(European Association ofUrology,EAU)更新发布了泌尿系感染管理指南，指出“应尽早明确泌尿系统感染的病原体和药敏结果，以便临床选择最佳的抗菌药物治疗方案”。因此，目前急需一种可以快速并且同步检测多种泌尿系统感染病原体的检测技术和方法。