[发明专利]蛋白酯酶E8及其表达纯化、晶体结构和应用

权利要求书

1. 一种来源于深海细菌E4A9^T的酯酶E8，其特征在于，有241个氨基酸，氨基酸序列如SEQ. ID. NO.1所示，分子量为26.28kDa。

2.一种如权利要求1所述的来源于深海细菌E4A9^T的酯酶E8的表达和纯化方法，其特征在于，包括：构建融合未突变的E8全长基因的重组载体，用该载体转化大肠杆菌，从而表达带有标签的融合蛋白E8，将上述获得的蛋白通过特异性的与所述特异标签识别的方法分离出目的蛋白，去除标签后再通过凝胶过滤层析的方法得到高纯度的E8的蛋白。

3. 一种权利要求1所述的来源于深海细菌E4A9^T的酯酶E8晶体,其特征在于，所述酯酶E8的晶体结构空间群为P2₁，一个不对称单位有两个分子；晶胞参数为：a＝48.84 Å，b＝69.74 Å，c＝70.60Å，α＝γ＝90°，β＝91.69°；

所述晶体三维结构中的原子坐标如表1所示。

4.根据权利要求3所述的酯酶E8晶体，其特征在于，在一个晶体学不对称单位内有两个蛋白分子；该结构共由6个β折叠和15个α螺旋组成，其中，所述的6个β折叠位于中心，所述的15个α螺旋围绕在β折叠的周围；其中，β折叠1，即含Ala2-Met7的氨基酸区段，α螺旋1，即含Gly13-Trp17的氨基酸区段，α螺旋2，即含Lys18-Lys27的氨基酸区段，β折叠2，即含Thr30-Phe32的氨基酸区段，α螺旋3，即含Phe39-Ile46的氨基酸区段，α螺旋4，即含Gly51-Glu66的氨基酸区段，β折叠3，即含Val71-Ser77的氨基酸区段，α螺旋5，即含Tyr78-Val82的氨基酸区段，α螺旋6，即含Ala83-Gly91的氨基酸区段，β折叠4，即含Arg93-Gly101的氨基酸区段，α螺旋7，即含Arg110-Met115的氨基酸区段，α螺旋8，即含Ser119-Gly132的氨基酸区段，α螺旋9，即含Gly140-His152的氨基酸区段，α螺旋10，即含Asp157-Leu168的氨基酸区段，α螺旋11，即含Met173-Cys178的氨基酸区段，α螺旋12，即含Gly183-Ile187的氨基酸区段，β折叠5，即含Pro190-His198的氨基酸区段，α螺旋13，即含Met201-Leu211的氨基酸区段，β折叠6，即含Thr214-His222的氨基酸区段，α螺旋14，即含Ala223-Asp228的氨基酸区段,α螺旋15，即含Pro229-Val240的氨基酸区段；

并且，第77位丝氨酸、第101位天冬氨酸与第222位组氨酸构成的催化三连体组成活性中心。

5.如权利要求1所述的来源于深海细菌E4A9^T的酯酶E8在催化酯类水解中的应用，所述的酯类为短链脂肪酸酯，所述短链脂肪酸酯为C2-C10短碳链。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的C2-C10短链脂肪酸酯为对硝基苯乙酸酯、对硝基苯丁酸酯、对硝基苯己酸酯、对硝基苯辛酸酯或对硝基苯癸酸酯。