[发明专利]一种分离番茄果实原生质体的方法

说明书

本发明公开了一种分离番茄果实原生质体的方法。本发明提供了一种分离番茄果实原生质体的方法，包括如下步骤：1)用酶液酶解番茄果实，收集酶解后果实组织；所述酶液包括纤维素酶、果胶酶、离析酶；2)将所述酶解后果实组织在PME溶液中孵育，实现番茄果实原生质体的分离，即得到番茄果实原生质体；采用本发明提供的方法对番茄果实原生质体进行分离，原生质体得率显著提高；纤维素酶等的用量减少，达到节省成本的目的；为深入研究果实发育相关基因表达模式提供了重要工具。由此可见，酶解处理结合温和消化技术对番茄果实原生质体进行分离的方法为果实发育相关蛋白的亚细胞定位以及基因表达模式的深入研究奠定了基础，实际应用价值高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分离番茄果实原生质体的方法。

背景技术

果实作为鲜活的农产品为人类健康提供了丰富的营养，是人们膳食结构中不可缺少的组分。番茄作为研究果实成熟和抗病机理的模式生物，是世界范围内广泛种植的第一大蔬菜作物,具有重要的经济和科研价值。近年来，番茄基因组序列的解读和群体遗传学的发展让人们能够能从基因组的角度加深对番茄的了解。随着功能基因组学、分子生物学研究的不断深入，果实发育进程相关的功能基因在细胞中表达的时空特异性及其调控模式得到了广泛关注，而对基因表达产物的亚细胞定位分析依赖于样品制备方法的不断优化。与其它模式生物细胞相比，果实细胞具有其特殊性:细胞含水量高，不同成熟度的果实细胞体积和结构具有显著差异，细胞间隙富含果胶等多糖类物质，而且细胞中富含有机酸、糖类、色素和芳香类物质。因此，以往对果实细胞的显微观察并不多见，而且试验中往往需要对果实进行切片或者刺伤操作，极大地影响了对果实细胞结构和功能的原位无损解析。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种分离番茄果实原生质体的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

1)用酶液酶解番茄果实，收集酶解后果实组织；

所述酶液包括纤维素酶、果胶酶、离析酶；

2)将所述酶解后果实组织在PME溶液中孵育，即得到番茄果实原生质体，实现番茄果实原生质体的分离；

所述PME溶液包括甘露醇、PIPES、MgCl₂和EDTA。

上述方法中，

所述甘露醇、所述PIPES、所述MgCl₂和所述EDTA的摩尔的量比为30-50：4-6：1-3：1-3；

或所述甘露醇、所述PIPES、所述MgCl₂和所述EDTA的摩尔的量比为40：5：2：1；

或所述甘露醇、所述PIPES、所述MgCl₂和所述EDTA的摩尔的量比为40：4：1：1；

或，所述纤维素酶、所述果胶酶、所述离析酶的质量比为5-10：3-5：3-5；

或，所述纤维素酶、所述果胶酶、所述离析酶的质量比为2：1：1。

上述方法中，

所述PME溶液由300-500mM甘露醇、40-60mM PIPES、10-30mM MgCl₂、10-30mM EDTA和水组成；

或，所述PME溶液由400mM甘露醇、50mM PIPES、20mM MgCl₂、10mM EDTA和水组成；

或，所述PME溶液由400mM甘露醇、40mM PIPES、10mM MgCl₂、10mM EDTA和水组成；

或，所述PME溶液的pH为6-8。

上述方法中，