[发明专利]一种酶法制备山核桃蛋白的方法

权利要求书

1.一种酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、山核桃粉原料的制备；

步骤二、一次酶解：将山核桃粉原料和水混匀制得一次浆液，调节一次浆液pH，并加入一次复合酶酶解，待酶解反应结束进行灭酶处理，得到一次酶解液，并对一次酶解液进行微波处理，得到微波酶解液；

步骤三、一次提取：将微波酶解液进行一次碱提，得到一次碱提液，并将其离心分离得到一次蛋白液和残渣沉淀；

步骤四、二次酶解：将残渣沉淀和水混匀制得二次浆液，调节二次浆液pH，加入二次复合酶酶解，并在酶解过程中进行超声振荡处理，待酶解反应结束进行灭酶处理，得到二次酶解液；

步骤五、二次提取：将二次酶解液进行二次碱提，得到二次碱提液，并将其离心分离得到二次蛋白液；

步骤六、酸沉：将一次蛋白液和二次蛋白液混匀，调节pH后进行酸沉处理，离心分离得到蛋白粉；

步骤七、冷冻干燥：将蛋白粉进行冷冻干燥处理，即得山核桃蛋白。

2.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，所述步骤一中山核桃粉原料的制备过程为：将山核桃去壳后采用六号溶剂浸泡，脱溶后得到脱脂的山核桃粕，其残油量为1.4～2.0%，并将脱脂的山核桃粕粉碎过筛得到颗粒大小为100～150目筛的山核桃粉原料。

3.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，所述步骤二中一次酶解的过程如下：将山核桃粉原料和水按料液比1g:15～25mL混匀制得一次浆液，在一次浆液中加入盐酸或柠檬酸将一次浆液pH调至3～5，并加入一次复合酶酶解，酶解反应温度为50～60℃，酶解反应时间为4～8小时，待酶解反应结束，升温至80～90℃灭酶10～20分钟，得到一次酶解液，并对一次酶解液进行微波处理，微波功率为250～500W，微波时间为15～25分钟，得到微波酶解液。

4.如权利要求3所述的酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，所述步骤二中的一次复合酶采用半纤维素酶+原果胶酶+果胶甲酯水解酶+果胶酸酶，所述半纤维素酶、原果胶酶、果胶甲酯水解酶和果胶酸酶的用量为1：3～6：2～4：4～8，且一次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的1000～2000u/g。

5.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，所述步骤三中一次提取的条件为：碱提料液比1g:15～25mL，碱提pH9～12，碱提温度45～55℃，碱提时间2～4h。

6.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，所述步骤四中二次酶解的过程如下：将残渣沉淀和水按1g:4～8mL混匀制得二次浆液，在二次浆液中加入盐酸或柠檬酸将二次浆液pH调至4～5，加入二次复合酶酶解，酶解反应温度为45～55℃，酶解反应时间为2～5小时，并在酶解过程中进行超声振荡处理，超声频率为2KHz，超声功率为400～800W，待酶解反应结束，升温至80～90℃灭酶10～20分钟，得到二次酶解液。

7.如权利要求6所述的酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，所述步骤四中的二次复合酶采用半纤维素酶+糖化酶，所述半纤维素酶和糖化酶的用量为1：2～4，且二次复合酶的加酶量为山核桃粉原料用量的2000～3000u/g。

8.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，所述步骤五中二次提取的条件为：碱提料液比1g:5～10mL，碱提pH9～12，碱提温度45～55℃，碱提时间1～3h。

9.如权利要求1所述的酶法制备山核桃蛋白的方法，其特征在于，所述步骤六中酸沉过程为：将一次蛋白液和二次蛋白液混匀，加入盐酸或柠檬酸调节pH至4.5进行酸沉，酸沉温度为20～30℃，待出现絮状物后离心分离得到蛋白粉。