[发明专利]一种乳制品中蛋白掺假的分析方法

权利要求书

1.一种乳制品中蛋白掺假的分析方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）样品液和标准液的制备：将样品分为两份，一份进行碱解，一份酸解；碱解后以酸进行中和，酸解后进行蒸干并以稀酸复溶，复溶液以衍生剂进行衍生化，有机滤膜过滤，得到样品液；分别配制色氨酸标准溶液以及苏氨酸、缬氨酸和赖氨酸的混合标准溶液衍生液；

（2）含量测定：分别将步骤（1）中所述的标准溶液、混合标准溶液衍生液及样品液注入高效液相色谱仪中，然后测量标准溶液、混合标准溶液衍生液及样品液中色氨酸、苏氨酸、缬氨酸、赖氨酸相对应的峰面积，计算样品液中色氨酸、苏氨酸、缬氨酸和赖氨酸的含量。

2.根据权利要求1所述的分析方法，所述碱解为以氢氧化锂溶液为碱，通氮排氧后在105~110℃下进行碱解19~21h；所述酸解为以盐酸溶液为酸，通氮排氧后在105~110℃下进行酸解21~23h；所述中和为用酸将体系的pH值调至7±0.05；稀酸复溶为以0.005~0.015mol/L盐酸水溶液为稀酸；所述衍生化为以衍生剂对酸解复溶液进行室温衍生50~70min。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于步骤（1）中，所述碱解为以氢氧化锂溶液为碱，通氮排氧后在110℃下进行碱解20h；所述酸解为以盐酸溶液为酸，通氮排氧后在110℃下进行酸解22h；所述中和为用酸将体系的pH值调至7；稀酸复溶为以0.01mol/L盐酸水溶液为稀酸；所述衍生化为以衍生剂对酸解复溶液进行室温衍生1h。

4.根据权利要求1、2或3所述的分析方法，其特征在于所述衍生剂为异硫氰酸苯酯。

5.根据权利要求1、2或3所述的分析方法，其特征在于所述衍生剂为体积比为1:1的0.1 mol/L 异硫氰酸苯酯-乙腈溶液及1 mol/L 三乙胺-乙腈溶液。

6.根据权利要求1、2或3所述的分析方法，其特征在于碱解为以4~8mol/L氢氧化锂溶液为碱；酸解为以6mol/L盐酸溶液为酸。

7.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于步骤（2）中含量测定所用的色谱条件为：紫外检测器，检测波长为240~260nm；色谱柱为碳十八液相色谱柱；乙腈与15~30mmol/L磷酸氢二钾组成的缓冲溶液作为流动相；控制乙腈浓度在10~70体积%范围内进行梯度洗脱；流速为0.5~1.5ml/min；柱温为20~35℃；进样量为1~20μL。

8.根据权利要求7所述的分析方法，其特征在于所述的色谱条件为：紫外检测器，检测波长为254nm；色谱柱为SunFire^TM C18型色谱柱；乙腈与25mmol/L磷酸氢二钾组成的缓冲溶液作为流动相；流速为1ml/min；柱温25℃；进样量为10μL。

9.根据权利要求7所述的分析方法，其特征在于梯度洗脱的条件为：0~1分钟，乙腈在缓冲溶液中的比例由10体积%上升为25体积%；1~21分钟，乙腈比例由25体积%上升为70体积%。

10.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于步骤（2）中所述的含量测定，其含量计算方法为标准曲线法。