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[发明专利]一种提高骨髓瘤杀伤活性的NK细胞制备方法-CN202111009846.8有效
发明人：郑成云;任婧;姜杨 -专利权人：山东大学第二医院
申请日： 2021-08-31 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明属于生物医药领域，提供了一种提高骨髓瘤杀伤活性的NK细胞制备方法：NK细胞中加入GSK‑3β抑制剂孵育。本发明提供的提高NK细胞杀伤活性的方法，采用GSK‑3β抑制剂处理，可以增强NK细胞对骨髓瘤细胞的杀伤能力。本发明制备过程简单、可操作性强，为临床医学应用提供了可行的办法。
一种提高骨髓瘤杀伤活性 nk 细胞制备方法

[发明专利]取代的1－哌啶－4－基－4－吡咯烷－3－基哌嗪衍生物及其作为神经激肽拮抗剂的用途-CN200380106356.3无效
发明人： F·E·詹森斯;F·M·索门;B·C·A·G·德贝克;J·E·利奈茨 -专利权人：詹森药业有限公司
申请日： 2003-12-17 - 公布日： 2006-01-25 - 主分类号： C07D401/12 文献下载
摘要：本发明涉及具有神经肽拮抗活性，特别是NK₁拮抗活性，合并的NK₁/NK₃拮抗活性及合并的NK₁/NK₂/NK₃拮抗活性的取代的－哌啶－4－基－4－咯烷－3－基－哌嗪衍生物，其制法，包含该化合物的组合物及其作为医药品，特别是用于治疗精神分裂症，焦虑，抑郁，呕吐和IBS的用途
取代哌啶吡咯烷基哌嗪衍生物及其作为神经拮抗剂用途

[发明专利]一种体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的方法-CN201910066688.6在审
发明人：赵报;邓蒙蒙;刘丹;吴疆;王保如;程箫 -专利权人：安徽瑞达健康产业有限公司
申请日： 2019-01-24 - 公布日： 2019-05-28 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开一种体外稳定扩增高纯度、高细胞毒活性NK细胞的方法，体外稳定扩增NK细胞方法包括以下步骤：(1)分离单个核细胞；(2)免疫分选去除CD3⁺T淋巴细胞；(3)加入含NK细胞扩增所需细胞因子500ng/ml IL‑15、10‑500ng/ml IL‑12、10‑500ng/ml IL‑21、10‑500ng/ml IL‑18和500‑2000U/ml IL‑2)的无血清培养基；(4)第2‑5天NK细胞全换液；(5)NK细胞收获。该方法可以稳定获得大量高纯度、高细胞毒活性NK细胞，可用于肿瘤细胞免疫治疗。
细胞毒活性扩增种体增高无血清培养基单个核细胞免疫分选免疫治疗细胞因子肿瘤细胞高纯度换液可用去除体外收获

[发明专利]一种双特异性抗体NK细胞制备方法及其细胞和应用-CN202010704663.7在审
发明人：张扬;周晓宇;李陶;张立忠 -专利权人：中科宝承生物医学科技有限公司
申请日： 2020-07-21 - 公布日： 2020-10-27 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本申请提供一种双特异性抗体NK细胞制备方法及其细胞和应用，所述方法包括培养NK细胞、构建CD16A/HSP70双抗慢病毒表达载体、将CD16A/HSP70双抗慢病毒表达载体感染所述NK细胞得到CD16A/HSP70抗体的双特异性抗体NK细胞。本申请制备的NK细胞的细胞特异性表型优秀以及纯度高；其中CD3‑CD56+达到97.13％，CD3‑CD56+CD16+达到93％；携带有CD16A/HSP70双抗慢病毒表达载体的NK细胞能够有效消除肝癌细胞以及抑制肝癌肿瘤体积增加的能力
一种特异性抗体 nk 细胞制备方法及其应用

[发明专利]配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC-CIK、NK细胞的试剂盒及其使用方法-CN201610278809.X在审
发明人：秦臻;鲁振宇;韩洪起;张冰晶;刘俊江;徐悦 -专利权人：天津普瑞赛尔生物科技有限公司
申请日： 2016-04-27 - 公布日： 2016-08-03 - 主分类号： C12N5/0784 文献下载
摘要：本发明公开了一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC‑CIK、NK细胞的试剂盒及其使用方法，包括DC套盒：10ug干粉DC‑A、5ug干粉DC‑B；CIK套盒：6支干粉CIK‑A(30ug/支)、10ug干粉CIK‑B、20ug干粉CIK‑C；NK套盒：5支干粉NK‑A(50ug/支)、10ug干粉NK‑B、5ug干粉NK‑C。本发明利用DC‑CIK、NK细胞诱导试剂盒能够配合淋巴细胞培养基在最短的时间内诱导扩增出5*10⁹以上的淋巴细胞，其中CIK细胞(CD3⁺CD56⁺)比例达到25％以上，NK细胞(CD3^‑CD56⁺)比例达到50％以上。为体外大规模扩增DC‑CIK、NK细胞提供便利的方法，为相关研究及临床实验提供便利。
配合淋巴细胞培养基快速诱导大量 dc cik nk 细胞试剂盒及其使用方法

[发明专利]一种用于预测NK/T细胞淋巴瘤患病风险的试剂盒-CN202211297370.7在审
发明人：冯琳;田锦绣;王瑞华;孙颖;李志铭;邹雄;林钰欣 -专利权人：中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）
申请日： 2022-10-21 - 公布日： 2023-03-03 - 主分类号： G01N33/574 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于预测NK/T细胞淋巴瘤患病风险的试剂盒。本发明通过分析人白细胞抗原HLA‑DRB1蛋白的氨基酸序列以及EB病毒EBNA3B核抗原蛋白的氨基酸表位变异，发现了人白细胞抗原HLA‑DRB1蛋白中与NK/T细胞淋巴瘤相关的特征氨基酸和EBNA3B氨基酸表位变异，由此提供了一种用于预测NK/T细胞淋巴瘤患病风险的试剂盒。本发明以人白细胞抗原HLA和EB病毒变异为出发点，得到了其与NK/T细胞淋巴瘤易感性的关系，为预测NK/T细胞淋巴瘤发病风险，也为NK/T细胞淋巴瘤的预防，筛查等提供了新的策略和方法，有助于NK/T细胞淋巴瘤的早期诊断，降低NK/T细胞淋巴瘤的死亡率。
一种用于预测 nk 细胞淋巴瘤患病风险试剂盒

[发明专利]一种体外扩增NK细胞的方法-CN201210541658.4无效
发明人：叶永清;杨雪晶;苏国新 -专利权人：上海柯莱逊生物技术有限公司
申请日： 2012-12-13 - 公布日： 2013-03-27 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及NK细胞的培养扩增方法，具体涉及一种体外大量扩增NK细胞的方法，a.将外周血单个核细胞接种在CD3McAb和CD226McAb预包被的培养瓶中共培养，b.加入IL-2和IL-18共培养72小时以刺激扩增NK细胞，c.将NK细胞与经致死处理的K562细胞和含有IL-2和IL-18的无血清培养基转入细胞培养袋中共培养，d.收获NK细胞，本发明将CD3McAb和CD226McAb两种抗体同时包被，促进细胞因子合成和ADCC作用，显著提高了NK细胞的杀伤毒性，仅仅通过IL-2和IL-18两种细胞因子就实现了对NK细胞的激活和扩增，即保证了NK细胞的扩增倍数和细胞毒性，又降低了细胞培养的成本。
一种体外扩增 nk 细胞方法

[发明专利]一种NK细胞评估模型及NK细胞杀伤肿瘤细胞毒力的评价方法-CN201910696469.6在审
发明人：胡劲松;张丹;雷莉;陈萍;王妍梦;吕楠 -专利权人：西安交通大学
申请日： 2019-07-30 - 公布日： 2019-11-29 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一个提高NK细胞杀伤肿瘤细胞毒力的方法。在体外模拟肿瘤缺氧条件下，(1)NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力下降，与此同时，NK细胞毒力相关分子GranzymeB，IFN‑γ，脱颗粒标志物CD107a以及细胞表面杀伤活性受体NKp30，NKp46和NKG2D(2)同时，缺氧所引起的NK细胞毒力降低还与ERK和STAT3这两个NK细胞毒力相关信号通路的活化受到削弱有关，其磷酸化水平被缺氧降低。(3)在NK细胞中，缺氧所降低的ERK和STAT3磷酸化与活化与SHP‑1的表达有关：缺氧会升高SHP‑1表达，而用小分子化合物TPI‑1抑制SHP‑1或利用基因敲低SHP‑1基因表达后，均成功地逆转了缺氧所导致的NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的降低。
毒力缺氧杀伤肿瘤细胞活化杀伤肿瘤细胞活性小分子化合物磷酸化水平基因表达利用基因缺氧条件杀伤活性体外模拟细胞表面相关信号标志物磷酸化逆转升高肿瘤削弱成功

[发明专利]一种用于自体或通用NK细胞体外培养的刺激细胞的制备方法-CN202110388924.3在审
发明人：张进;裴端卿 -专利权人：北京和斯瑞生物技术有限公司
申请日： 2021-04-12 - 公布日： 2022-10-18 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明属于细胞生物技术领域，具体涉及一种用于NK细胞体外培养的刺激细胞的制备方法。所述方法包括辐照新分离的外周血单个核细胞(PBMCs)获得NK刺激细胞NKS；或将外周血单个核细胞(PBMCs)加入含自体血清、rhIL2、rhIL15的培养基，体外培养7‑14天后经过辐照获得NK刺激细胞其中所获得的刺激细胞NKS主要包括淋巴细胞，单核细胞和粒细胞；刺激细胞NKST主要包括25‑60％的CD3+/CD56+细胞，0‑3％的CD3‑CD56+细胞、40‑75％的CD3+CD56‑细胞。将本发明所述的刺激细胞用于自体或通用NK细胞体外培养，能够显著提高NK细胞体外扩增的倍数，使NK细胞各项活化指标良好，且具有好的生物活性(包括细胞杀伤作用和细胞因子分泌作用)。所述方法简单易行，成本较低，可以大规模应用于自体和通用NK细胞的体外培养。
一种用于通用 nk 细胞体外培养刺激制备方法

[发明专利]葡甘聚糖在提高NK细胞杀伤活性、制备NK细胞培养基方面的应用-CN202010537689.7在审
发明人：陈茜;张潇武;许泽 -专利权人：宁夏厚泽生物医药科技有限公司
申请日： 2020-06-12 - 公布日： 2020-09-11 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了葡甘聚糖在提高NK细胞杀伤活性、制备NK细胞培养基方面的应用。自然杀伤细胞(NK细胞，CD3‑CD56+)作为机体固有免疫的重要成员，是抗肿瘤免疫的先行者，在肿瘤免疫方面发挥着至关重要的作用如何提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，是大规模使用NK细胞进行细胞免疫治疗的关键。本发明实验结果表明，魔芋葡甘聚糖具有提高NK细胞对肿瘤细胞杀伤力的活性，可以用于制备提高NK细胞对肿瘤细胞杀伤力的细胞培养基。
聚糖提高 nk 细胞杀伤活性制备培养基方面应用

[发明专利]一种提升NK细胞转染效率的方法-CN201810830835.8有效
发明人：顾雨春;尹乐;谭声江 -专利权人：国健呈诺生物科技（北京）有限公司
申请日： 2018-07-26 - 公布日： 2021-07-02 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及NK细胞体外扩增技术领域，具体而言，涉及一种提升NK细胞转染效率的方法。该种提升NK细胞转染效率的方法，NK细胞进行慢病毒感染时，第一次感染加入包含CAR的慢病毒载体的同时加入助感染剂1，第二次感染加入包含CAR的慢病毒载体的同时加入助感染剂2、助感染剂3和助感染剂4；所述助感染剂1为含有聚凝胺溶液；所述助感染剂2为含有IL2的溶液；所述助感染剂3为含有IL12的溶液；所述助感染剂4为含有PHA的溶液。本发明提供的Car‑NK转染的方法，通过在转染的过程中加入不同的助感染剂，提高了NK细胞的转染效率，可将NK细胞的慢病毒转染效率由不足10％提高到50％～60％。
一种提升 nk 细胞转染效率方法

[发明专利]一种NK细胞的双层培养装置、系统及方法-CN201810051977.4在审
发明人：陈阳 -专利权人：深圳光彩生命工程技术有限公司
申请日： 2018-01-19 - 公布日： 2018-06-22 - 主分类号： C12M3/06 文献下载
摘要：一种NK细胞的双层培养装置，包括：NK细胞室，用于供养NK细胞，所述NK细胞室包括侧壁和基本水平的底壁，所述底壁由透气性材料构成，所述底壁还设有半透膜；细胞培养室，用于接受供养物质以培养滋养细胞。本发明的有益效果为：1、NK细胞室和细胞培养室通过半透膜将两者隔开，使得NK细胞室中NK细胞所释放的细胞因子、水分以及营养和抗体小分子物质可以通过半透膜进入到细胞培养室中为其利用，且两者中所培养的细胞不会透过半透膜进行混合，降低了细胞培养的成本，且结构简单；2、由于NK细胞室底壁由透气性材料构成，有助于NK细胞室和细胞培养室的气体交换；3、可以抑制NK细胞室的压力变动且抑制气泡流入到细胞培养室。
细胞培养室半透膜底壁透气性材料双层培养细胞培养小分子物质细胞基本水平气体交换细胞因子压力变动侧壁隔开抗体滋养释放

[发明专利]一种NK细胞的培养方法-CN201510264184.7在审
发明人：姚惟琦;武栋成;袁冰 -专利权人：武汉汉密顿生物科技股份有限公司
申请日： 2015-05-21 - 公布日： 2015-09-23 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种NK细胞的培养方法，包括以下步骤(1)从人外周血或脐带血中分离单个核细胞；(2)将单个核细胞接种到适合淋巴细胞培养的培养基中，加入CD3单克隆抗体，重组人白细胞介素2和自体血浆，培养3-5天；(3)加入重组人白细胞介素2和自体血浆，培养；(4)收获NK细胞。本发明提供的NK细胞培养方法降低了培养成本，保证了NK细胞的扩增倍数和细胞毒性，节省了操作时间的同时减少了操作失误的可能性，使NK细胞的获得效率更高且安全性更好。
一种 nk 细胞培养方法

[发明专利]一种NK细胞及在肿瘤治疗方面的应用-CN202010792695.7有效
发明人：不公告发明人 -专利权人：山东翰康生物科技有限公司
申请日： 2020-08-10 - 公布日： 2021-04-02 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种NK细胞及在肿瘤治疗方面的应用。高杀伤活性NK细胞的获得是利用NK细胞过继性治疗肿瘤细胞的关键之一。本发明发现，miR‑124‑3p高表达的NK细胞具有更强的杀伤活性，对肿瘤细胞具有更强的杀伤力，因而可以用于制备成抗肿瘤细胞制剂。
一种 nk 细胞肿瘤治疗方面应用

[发明专利]通用杀伤T细胞-CN201680006587.4在审
发明人：塞巴斯蒂安·沃尔柴利;埃尔斯·马里特·因德尔伯格·苏索;古斯塔夫·高德耐克;贡纳·科瓦海姆 -专利权人：奥斯陆大学医院HF
申请日： 2016-01-22 - 公布日： 2017-10-13 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种经过修饰的自然杀伤(NK)细胞和其在个体化医疗中的用途。本发明的经过修饰的NK细胞是非免疫原性的，意指它们能够投予给任何接受者受试者而不被宿主免疫系统排斥(它们是“通用”的)。在第一实施例中，所述非免疫原性NK细胞经过修饰以表达CD3，从而使T细胞受体(TcR)得以表达。在另一个实施例中，所述非免疫原性NK细胞经过进一步修饰以表达TcR以及CD3共受体。CD3与特异性TcR的共表达导致所述经过修饰的NK细胞显现针对靶细胞的抗原特异性细胞毒性。通用NK细胞因此能够被靶向特异性抗原，并且因此可用于个体化医疗中，尤其是肿瘤学领域中。
通用杀伤细胞