本发明公开了一种抗Dig的抗体及其在测序中的应用,本发明的抗体包括选自SEQ ID NO:1‑4的重链可变区氨基酸序列和选自SEQ ID NO:9‑12的轻链可变区氨基酸序列。本发明的单克隆抗体能够特异性识别Dig抗原,将其与多个荧光素酶Nluc经化学偶联制备的Nluc‑Ab‑Dig能够特异性识别Dig‑dNTP上的Dig分子,当加入Nluc底物后,通过捕获Nluc的荧光信号来完成测序本发明首次采用荧光素酶Nluc化学偶联标记Anti‑Dig,可提高测序结果的特异性和灵敏度,并首次将其用于测序仪的测序试剂盒。