本发明公开了一种酶法制备5’‑鸟苷酸的方法,属于食品加工技术领域。所述制备方法包括:以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的酸性磷酸转移酶突变体纯酶为催化剂,添加到含有鸟苷和焦磷酸钠的pH为3.6~9.0的反应溶液中,在25~60℃条件下进行催化反应,反应结束后,获得含5’‑鸟苷酸的混合液,再经分离纯化获得5’‑鸟苷酸。本发明选用的酸性磷酸转移酶突变体具有磷酸转移酶活性高,水解酶活性低,底物特异性高的优点;方法工艺环保,反应条件温和,成本低,得到的目标产物收率高,制备方法简单,适用于5’‑鸟苷酸的工业化生产,应用前景广阔