本发明公开一种磷酸转移酶突变体及其应用。本发明提供的磷酸转移酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.2、SEQ ID No.4或SEQ ID No.6所示,编码磷酸转移酶突变体的核苷酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.3或SEQ本发明还提供使用重组微生物发酵生产5’‑核苷酸、制备高酶活性的磷酸转移酶的方法。本发明制备得到的高酶活性磷酸转移酶可以用于生产高纯度呈味核苷酸二钠产品5’‑肌苷酸二钠和5’‑鸟苷酸二钠,其纯度可达到97.5%以上,达到食品级要求,同时收率也有显著提升,达到125%以上,在工业化生产中可大幅降低生产成本
本发明提供了一种突变的核糖磷酸转移酶及其编码基因,以及利用该基因生产5’-肌苷酸的方法。该突变核糖磷酸转移酶及其编码基因的氨基酸和核苷酸序列如SEQ ID NO.5和6所示。经过验证,证明突变后的序列不仅能够正常表达核糖磷酸转移酶,且突变后肌苷-5’肌苷酸的摩尔转化率比原始的核糖磷酸转移酶提高了5倍。
本发明涉及微生物和基因工程技术领域,具体涉及葡萄糖磷酸转移酶突变体及其在提高核苷产量中的应用。本发明提供的葡萄糖磷酸转移酶突变体具有SEQ ID NO.1或2所示的氨基酸序列。该葡萄糖磷酸转移酶及其编码基因的突变体能够显著提高芽孢杆菌的核苷生产能力,将芽孢杆菌的葡萄糖磷酸转移酶编码基因替换为葡萄糖磷酸转移酶突变体的编码基因得到的重组芽孢杆菌的嘌呤核苷产量显著提高,同时,引入该突变体不会对菌株造成生长减慢
本发明公开了一种酶法制备5’‑鸟苷酸的方法,属于食品加工技术领域。所述制备方法包括:以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的酸性磷酸转移酶突变体纯酶为催化剂,添加到含有鸟苷和焦磷酸钠的pH为3.6~9.0的反应溶液中,在25~60℃条件下进行催化反应,反应结束后,获得含本发明选用的酸性磷酸转移酶突变体具有磷酸转移酶活性高,水解酶活性低,底物特异性高的优点;方法工艺环保,反应条件温和,成本低,得到的目标产物收率高,制备方法简单,适用于5’‑鸟苷酸的工业化生产,应用前景广阔