本发明公开了一种可溶性幽门螺杆菌重组抗原CagA的重组载体及诱导表达方法,1)将SEQ ID NO:1所示的CagA目的基因连接在表达载体pET28a(+)中,构成重组载体pET28a‑CagA;2)将重组载体pET28a‑CagA转化至外源蛋白表达的宿主细胞E.coli Top 10中进行诱导表达,得到表达CagA的重组大肠杆菌pET28a(+)/CagA/E.coli Top 10。本发明的重组载体,采用pET28a(+)质粒获得的重组载体表达效果最好,同时pET28a(+)载体序列中除了组氨酸标签序列没有其它的标签或融合蛋白基因序列,获得的CagA蛋白最接近原始蛋白氨基酸序列和蛋白结构,使得外源蛋白的可溶性表达水平高,具备很高的生物学活性,获得了单独高效表达的可溶性重组蛋白CagA,实现目的蛋白的可溶性表达,工艺简单,重复性好,对CagA蛋白后续进行更有效深入的研究提供了基础。
本发明涉及一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸及其应用,属于生物技术领域。本发明提供了一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸,所述试纸以融合蛋白作为幽门螺杆菌CagA抗体的检测抗原,所述融合蛋白包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽,或者,与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80%以上同源性,且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽;所述试纸使用的融合蛋白能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合,在幽门螺杆菌CagA抗体检测中具有极高的应用前景;所述试纸使用的融合蛋白表达量较高
本发明涉及融合蛋白及其在幽门螺杆菌CagA抗体检测中的应用,属于生物技术领域。本发明提供了一种融合蛋白,所述融合蛋白包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽,或者,与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80%以上同源性,且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽;所述融合蛋白能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合,在幽门螺杆菌CagA抗体检测中具有极高的应用前景。
本发明属于生物医药领域,具体涉及一种人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体构建方法。所述构建方法包括密码子优化步骤,在所述密码子优化步骤中合成人源化cagA基因,所述人源化cagA基因的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO:1所示。本法构建得到人源化幽门螺旋杆菌cagA真核表达载体可在胃癌细胞中大量表达cagA蛋白,为研究cagA基因编码的蛋白的致癌致病机制创造了条件。本技术方案可应用于幽门螺旋杆菌的致病机制研究的实践中。
该试纸条金标垫上固化有胶体金标记的抗人IgG兔多克隆抗体,层析膜包括从靠近样品垫端至靠近吸水垫端依次平行设置、且相互间隔的T1检测线、T2检测线和质控线,T1检测线包被有重组HP CagA+VacA融合抗原,T2检测线包被有天然HP尿素酶,质控线包被有羊抗兔IgG抗体;重组HP CagA+VacA融合抗原对应的CagA的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示,VacA的蛋白质序列如SEQ ID NO:4所示,该试纸条能同时检测尿液中的尿素酶、CagA和VacA幽门螺杆菌抗体,并且检测结果与UBT检测方法的一致性能达到97%以上。