本发明公开了一种来源于南极细菌的耐低温磷脂酶D及其制备方法和应用，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；该耐低温磷脂酶D基因序列如SEQ IDNO:2所示。本发明获得一株耐低温磷脂酶D的大肠杆菌重组表达菌株，利用该菌株，可实现重组蛋白大量可溶性表达，易于后期纯化及蛋白获得。本发明的表达产物具备有良好的低温储藏稳定性和良好的酶活力，同时对有机溶剂和表面活性剂有一定的耐受性。本发明获得磷脂酶D可适用于磷脂改性，生产磷脂酸及各类天然稀有磷脂和非天然磷脂化合物，应用于生物、食品、医药、化妆品、农业、工业等领域。
本发明提供的具有合成磷脂酰肌醇的能力的修饰型磷脂酶D包含(A)SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列187位、191位和385位的氨基酸残基的至少一个氨基酸残基被置换为其它的氨基酸残基所得的氨基酸序列，或(B)在该(A)的氨基酸序列中，与位于该187位、191位和385位的氨基酸残基不同位置的至少一个氨基酸残基具有置换、缺失、插入和/或附加，且具有合成磷脂酰肌醇的能力的多肽的氨基酸序列。使用本发明的修饰型磷脂酶D，可以由磷脂高效地制备磷脂酰肌醇。本发明还提供筛选磷脂酶D的方法，该磷脂酶D具有合成有二醇基的酰基甘油磷脂的能力。
本发明属于酶的基因工程技术领域，本发明公开了一种鞘磷脂酶D突变体及其应用，所述的鞘磷脂酶D突变体是以来自Loxoscelesarizonica的鞘磷脂酶D(Laz‑SMD)(氨基酸序列SEQ ID NO本发明改造获得的Laz‑SMD突变体水解溶血磷脂底物改变了原有反应只产环状磷脂酸(cPA)的特点，转而只反应产生溶血磷脂酸，本发明提供了一种利用Laz‑SMD水解溶血磷脂生产溶血磷脂酸的方法，进一步提升了该酶在药物领域的利用价值
