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[发明专利]组氨酸标签蛋白或含组氨酸标签的融合蛋白的免疫学定量检测方法-CN200810235706.0无效
发明人：陈亚利;张韫;宋诗雨 -专利权人：江苏先声药物研究有限公司
申请日： 2008-12-04 - 公布日： 2009-04-22 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种双抗体夹心免疫吸附试验来定量检测组氨酸标签蛋白或含组氨酸标签的融合蛋白的方法，其定量检测方法是：它利用在制备抗标签蛋白多克隆抗体的基础上，经过与多聚组氨酸单克隆抗体及相应酶标抗抗体的浓度配伍试验，建立双抗体夹心酶联免疫吸附方法，来定量检测组氨酸标签蛋白或含组氨酸标签的融合蛋白。此方法不仅可以定量检测，而且适用范围广、特异性强、灵敏度高、重复性好、非常适合于快速定量检测组氨酸标签蛋白或含组氨酸标签的融合蛋白。
组氨酸标签蛋白融合免疫学定量检测方法

[发明专利]钙蛋白酶磷酸化水平的测定方法-CN201510919423.8在审
发明人：张德权;杜曼婷;陈丽;李铮;李欣;高星;李蒙;高玲玲 -专利权人：中国农业科学院农产品加工研究所
申请日： 2015-12-10 - 公布日： 2016-02-17 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种钙蛋白酶磷酸化水平的测定方法，包括：步骤一、将含有钙蛋白酶的蛋白样品的蛋白浓度调至5.83～12.5μg/μl，之后向其中加入磷酸化抗体，磷酸化抗体与含有钙蛋白酶的蛋白样品中的蛋白的总反应量的质量比为1:1750～2500，然后将二者于4℃下震荡孵育，以形成免疫复合物，再通过蛋白质免疫沉淀方法富集得到磷酸化的钙蛋白酶样品；以及，步骤二、通过蛋白质免疫印迹方法检测步骤一中得到的磷酸化的钙蛋白酶样品的磷酸化水平本发明通过蛋白质免疫沉淀和免疫印迹技术可以在宰后肌肉中检测出磷酸化的钙蛋白酶，所需的肌肉样品量少，操作过程简单，重复性好，检测所得条带清晰，试验方法对人体的潜在伤害小。
蛋白酶磷酸化水平测定方法

[发明专利]一种利用铜螯合磁珠分离铜蛋白质组的方法-CN201510636111.6有效
发明人：张红晓;王发园;侯典云 -专利权人：河南科技大学
申请日： 2015-09-30 - 公布日： 2018-05-29 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：一种利用铜螯合磁珠分离铜蛋白质组的方法，涉及蛋白质化学领域技术领域；取生物组织或细胞用液氮充分研磨后，加入蛋白提取液，混合均匀后，低温离心，获得变性的蛋白溶液；将铜螯合磁珠与变性的蛋白溶液进行混合，孵育，得到磁珠蛋白混合溶液；在磁珠蛋白混合溶液中加入其体积1倍的缓冲液1混悬，在外加磁场下倒去一半的上清液；重复4‑5次，得到混合液A；在混合液A中加入其体积1倍的缓冲液2，将所有的特异性铜结合蛋白，即铜蛋白质组分离出来，外加磁场下收集铜蛋白质组；本发明利用磁珠‑IDA来分离变性条件下的金属蛋白质组，大大简化了程序，提高了金属蛋白的获得效率，建立了一套适合于过量重金属处理条件下组织或细胞中金属蛋白质组的分离方法。
蛋白质组磁珠合磁铜螯蛋白混合溶液金属蛋白质蛋白溶液外加磁场分离铜缓冲液混合液变性蛋白提取液蛋白质化学铜结合蛋白重金属处理细胞变性条件低温离心金属蛋白领域技术生物组织研磨上清液孵育混悬液氮过量重复

[发明专利]一种适于蛋白质组学的牛支原体外膜蛋白提取方法-CN201410699960.1在审
发明人：李海利;魏成斌;张震;徐引弟;朗利敏;张青娴;候自花;蔺萍;游一;施巧婷;杨素新;崔忠华 -专利权人：河南省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2014-11-28 - 公布日： 2015-04-01 - 主分类号： C07K14/30 文献下载
摘要：本发明涉及一种适于蛋白质组学的牛支原体外膜蛋白提取方法。该方法包括菌体培养与收集、液氮研磨、恒温超声震荡、离心收集蛋白质沉淀、用乙醇和丙酮漂洗，然后用真空冷冻离心干燥，获得蛋白粉末后裂解处理；将裂解后的溶液混匀，离心后保留上清液，即得到牛支原体外膜蛋白。本发明对蛋白的提取步骤和使用试剂进行优化，大大提高了蛋白提取的效率和纯净度，有效除去了双向电泳中干扰第一向和第二向的杂质，和传统方法相比，方法简便、省工省时、蛋白提取效率高、干扰物少，可获得分辨率高、重复性好、蛋白点分布均匀、蛋白点清晰的图谱，对牛传染性胸膜肺炎支原体组学的研究及免疫蛋白的筛选研究具有重要意义。
一种适于蛋白质牛支原体外膜蛋白提取方法

[发明专利]用于植物表达重组人血白蛋白基因的转基因农杆菌株-CN201610306847.1在审
发明人：王大勇;陈林涛;韦双双 -专利权人：王大勇
申请日： 2016-05-11 - 公布日： 2016-08-17 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及用于在植物中表达重组人血白蛋白基因的农杆菌菌株。它解决了目前重组人血白蛋白不适合用微生物和动物为反应器进行产业化生产的问题。重组人血白蛋白转基因工程菌株为含有重组人血白蛋白基因质粒的农杆菌，表达出的蛋白质为人血白蛋白，菌株中所含有的重组人血白蛋白基因序列为在启动密码子前插入了Kozak序列的人血白蛋白开放阅读框碱基“基本序列”，或在此基础上在N端起始密码子后插入编码6个重复组氨酸的序列（6xHis），6xHis与白蛋白序列之间由编码肠激酶底物的序列连接的“改进序列”。本发明重组人血白蛋白转基因工程菌株可用于利用转基因植物规模化生产基因重组人血白蛋白。
用于植物表达重组人血白蛋白基因转基因杆菌

[发明专利]基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法、应用及固定化酶-CN202210362600.7在审
发明人：张桂敏;周晨;卢争辉;向腊;巫攀 -专利权人：湖北大学
申请日： 2022-04-07 - 公布日： 2022-07-01 - 主分类号： C12N11/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法、应用及固定化酶。该方法将基底蛋白的核苷酸序列和目标蛋白的核苷酸序列与断裂型内含肽两端的核苷酸序列分别连接，连接后分别进行融合表达；将融合表达后的基底蛋白制备成酶杂化纳米花，使基底蛋白被固定化；将固定化后的基底蛋白与融合表达后的目标蛋白混合，通过断裂型内含肽的反式自剪接功能直接进行特异性自组装，使目标蛋白被间接固定化。该方法将断裂型内含肽和酶杂化纳米花相结合，可将目标蛋白的纯酶或者粗酶液直接与固定化的基底蛋白结合，避免对蛋白构象的影响，高效便捷。该方法制备玉米赤霉烯酮降解的固定化酶，具有良好稳定性、催化效率和重复利用率。
基于蛋白反式剪接纳米固定方法应用

[发明专利]一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白及其应用-CN202110357115.6有效
发明人：赵俊;刘洁;刘家炉;凡玉芳;孔国庆;周炜;何志远 -专利权人：芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司;安徽普若汀生物科技有限公司
申请日： 2021-04-01 - 公布日： 2022-04-15 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明公开了一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白及其应用，该长效重组人丝聚蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示，该长效重组人丝聚蛋白的核苷酸序列所对应的氨基酸序列如Seq ID NO.2所示。长效重组人丝聚蛋白的氨基酸序列包括丝聚蛋白的氨基酸序列及人血清白蛋白的氨基酸序列，丝聚蛋白的氨基酸序列包括丝聚蛋白核苷酸序列重复单元C端的一个单体结构所对应的氨基酸序列。本发明提供的长效重组人丝聚蛋白能够促进角蛋白中间丝聚集并促进中间丝之间的二硫键形成、防止表皮水分的丢失和外界过敏物质的入侵以及降低紫外线诱导的表皮细胞凋亡的敏感性。融合HAS有效的提高了重组蛋白的稳定性。
一种酿酒酵母表达长效重组人丝聚蛋白及其应用

[发明专利]一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法-CN202011474977.9有效
发明人：杨慧娟;王海蜂;曹广添;陶菲 -专利权人：中国计量大学
申请日： 2020-12-15 - 公布日： 2022-12-16 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明提供了一种制备肌原纤维蛋白溶液的方法，包括以下步骤：(1)将去骨原料肉样制成肉糜状样；(2)提取肌原纤维蛋白；(3)冷冻干燥肌原纤维蛋白；(4)凝胶电泳及粗蛋白含量测试；(5)复溶冷冻干燥后的肌原纤维蛋白；(6)将制得的肌原纤维蛋白溶液于4℃冰箱中静置2h使其稳定；本发明通过冷冻干燥肌原纤维蛋白提取物，延长其贮藏期，解决了目前肌原纤维蛋白试验中需要现配现用且保存期短，重复性差的问题；在使用时复溶冷冻干燥后的肌原纤维蛋白，复溶效果较好；并且可方便地配制肌原纤维蛋白目标浓度，得到稳定的溶液，有助于完善试验条件，为研究肉及肉制品中的主要功能蛋白提供了一种可选择的试验步骤。
一种制备纤维蛋白溶液方法

[发明专利]一种血清白蛋白的脱脂方法-CN202110283934.0有效
发明人：范蓓;马小伟;安文琪;张学成;李光飞;李冠军 -专利权人：华兰生物工程股份有限公司
申请日： 2021-03-17 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C07K14/765 文献下载
摘要：本发明公开了一种血清白蛋白的脱脂方法。本发明提供了切向流过滤技术在对血清白蛋白进行脱脂中的应用。本发明还提供了一种血清白蛋白的脱脂方法，包括如下步骤：将血清白蛋白在特定溶液条件下，通过切向流过滤技术将白蛋白与结合物分离；所述特定溶液条件为能够实现白蛋白和所述结合物分离的溶液条件。本发明白蛋白脱脂效果可以达到白蛋白中脂肪酸含量不高于5μg/g白蛋白的水平，优于目前其他技术方案可以达到的白蛋白脱脂水平；血清白蛋白回收率不低于97％，优于活性炭吸附脱脂技术；切向流过滤膜可以多次重复使用
一种血清白蛋白脱脂方法

[发明专利]测定血红蛋白中各型珠蛋白链比率的方法及其应用-CN202210514636.2有效
发明人：余朝文 -专利权人：重庆医科大学附属儿童医院
申请日： 2022-05-11 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明属于生物化学检测技术领域，具体涉及一种测定血红蛋白中各型珠蛋白链比率的方法及其应用。本发明基于液相色谱‑串联质谱法，以含有甲酸的去离子水作流动相A，以含有甲酸的乙腈溶液作流动相B对血红蛋白中各型珠蛋白链特征片段进行分离；在电喷雾电离阳离子检测模式下，定量分析血红蛋白中各型珠蛋白链特征片段；然后通过得到的数据计算各型珠蛋白链的比率。通过测定各型珠蛋白链的比率，可有效识别重度、中度及轻度地中海贫血及异常血红蛋白病，并且此方法具有较高的精密度、重复性、灵敏度以及特异性。本发明为血红蛋白病患者提供了一种高效、快速的疾病筛查方法，对血红蛋白病的早期识别具有重要意义。
测定血红蛋白各型珠蛋白比率方法及其应用

[发明专利]一种从制备海藻酸盐微胶囊的废弃物中回收蛋白的方法-CN200710010200.5无效
发明人：修志龙;张杰;李晓辉 -专利权人：大连理工大学
申请日： 2007-01-24 - 公布日： 2007-08-08 - 主分类号： C07K1/36 文献下载
摘要：一种从制备海藻酸盐微胶囊的废弃物中回收蛋白的方法，属于生物分离工程领域，涉及到蛋白分离、纯化技术。本发明的技术特征是将含蛋白的凝胶化溶液与不符合制剂要求的微胶囊分离开来，对含蛋白的凝胶液进行浓缩、脱盐；而不符合制剂要求的微胶囊中加入破囊液后，分别在静置或超声的条件下，通过盐析沉淀的方法，从制备海藻酸盐微胶囊的废弃物中分离出蛋白，并采用凝胶层析的方法进一步纯化和浓缩目的蛋白。本发明的效果和益处是采用重复性好、不破坏蛋白类药物的生物活性、易于操作和工业放大的方法直接从载蛋白类药物海藻酸钙微胶囊中分离、回收蛋白，提高了蛋白类药物的利用率，大大降低了蛋白类药物传递系统的生产成本。
一种制备海藻微胶囊废弃物回收蛋白方法

[发明专利]HSA长效融合蛋白及其快速组装及分离纯化方法-CN201310594414.7无效
发明人：刘刚;邵妤;陈惠鹏;金晶;王微;曲国龙;阚乃鹏;谭俊杰;朱晨 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
申请日： 2013-11-21 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种HSA长效融合蛋白及其快速组装及分离纯化方法。该融合蛋白包含两个多肽区，第一区是由促胰岛素分泌肽Exendin-4的重复序列组成，第二区是由人血清白蛋白HSA的序列组成，第一区的C-末端与第二区的N-末端通过甘氨酸和丝氨酸两个氨基酸相连，或第一区N促胰岛素分泌肽Exendin-4的重复次数为1-4次，重复序列之间直接通过甘氨酸和丝氨酸相连。本发明利用Bglbrick的方法，能够随意的在HSA的N端或C端添加任意个数的Exendin-4，经过表达，纯化，得到高纯度的融合蛋白。
hsa 长效融合蛋白及其快速组装分离纯化方法

[发明专利]用于双向电泳的小鼠精子总蛋白提取和分离方法-CN201410447375.2在审
发明人：杨志强;孙子龙;魏瑞芬;罗广营;牛瑞燕;王金明;张建海;王俊东 -专利权人：山西农业大学
申请日： 2014-09-04 - 公布日： 2014-12-10 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于双向电泳的小鼠精子总蛋白提取和分离方法，包括精子的制备、精子裂解后沉淀其中的DNA、制备精子蛋白、制备蛋白提取样品、第一向等电聚焦电泳、第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、用考马斯亮蓝染色本发明方法使用Trizol彻底裂解精子，氯仿抽提蛋白，异丙醇、盐酸胍、乙醇去除杂质，丙酮纯化蛋白，很好的解决了小鼠精子含量少，采集困难，细胞体积小，细胞质少，富含顶体蛋白酶的问题。采用本发明方法得到的样品制备全、分离蛋白点多、重复性好、图谱清晰，经PDQuestsoftware软件检测，蛋白点多于1000个，为进一步质谱分析打好基础。
用于双向电泳小鼠精子蛋白提取分离方法

[发明专利]一种基于GST‑PullDown以及质谱分析技术寻找如皋黄鸡基因互作蛋白的方法-CN201611215943.1在审
发明人：李碧春;左其生;王颖洁;张亚妮;汤贝贝;李东;纪艳芹;连超;王飞;路镇宇 -专利权人：扬州大学
申请日： 2016-12-26 - 公布日： 2017-08-15 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于GST‑Pull Down以及质谱分析技术寻找如皋黄鸡基因互作蛋白的方法（1）目的基因克隆以及原核表达载体构建；（2）Pet‑49(b)‑GST‑目的基因的原核融合表达载体构建；（3）Pet‑49(b)‑GST‑目的基因进行原核表达；（4）对蛋白进行大量表达和破菌检测；（5）明确蛋白的表达位置后对表达的蛋白进行纯化和浓缩并进行GST‑Pull Down试验；（6）GST‑Pull Down后的蛋白进行蛋白质还原烷基化和胶内酶解并通过LC‑MS/MS鉴定获取目的基因的互作蛋白的序列。本发明能够较快的获得相关基因的互作蛋白；方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。
一种基于 gst pulldown 以及谱分析技术寻找如皋基因蛋白方法

[发明专利]一种颗粒化大豆蛋白及其制备方法-CN201710618270.2在审
发明人：郭健;张桃;杨晓泉 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2017-07-26 - 公布日： 2017-12-15 - 主分类号： A23J3/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种颗粒化大豆蛋白及其制备方法，属于大豆蛋白结构和功能的修饰领域。该方法在pH值为3.8～5.5的条件下，采用重复多次热处理结合高剪切的方式对大豆蛋白进行处理，再对其进行高压均质，喷雾干燥，得到粒径集中在2~20μm的颗粒化大豆蛋白产品。所得颗粒稳定，在pH值为2.0～8.0的环境中，颗粒的粒度和粘度基本不发生变化，并且颗粒的蛋白质不溶度超过85%。颗粒化大豆蛋白在12%浓度下，热诱导仍不形成凝胶，其凝胶特性远低于大豆分离蛋白，可应用于饮料、酸奶等食品体系中，在保持其口感的同时增加其蛋白质含量。
一种颗粒大豆蛋白及其制备方法