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[发明专利]一种快速鉴别文山三七与易混品屏边三七的PCR-RFLP方法-CN201310128370.9无效
发明人：张广辉;杨生超;杨云;陈军文;李翠婷;陈中坚;朱书生;何霞红 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2013-04-15 - 公布日： 2013-06-26 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速鉴别文山三七与易混品屏边三七的PCR-RFLP方法，该方法的PCR扩增采用的引物是由ITS正向引物和反向引物组成，所述的正向引物的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，反向引物的碱基序列如SEQ ID NO：2所示；PCR扩增产物纯化后，分别用限制性内切酶MluC Ⅰ、限制性内切酶Nla Ⅳ酶切，在MluC Ⅰ酶切图谱和NlaⅣ酶切图谱中，文山三七与屏边三七酶切图谱完全不同，可鉴别样品是否为文山三七、是否混入了屏边三七。本发明首次成功建立了文山三七、屏边三七的限制性内切酶酶切图谱，可以准确鉴别文山三七和屏边三七且快速，克服了感官评审难以鉴别文山三七原料的真伪问题。
一种快速鉴别文山三七易混品屏边 pcr rflp 方法

[发明专利]甘精胰岛素前体的酶切转化方法-CN201210532873.8在审
发明人：赵志全;熊继元;于锋臣 -专利权人：鲁南新时代生物技术有限公司
申请日： 2012-12-11 - 公布日： 2013-03-27 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种甘精胰岛素前体的酶切转化方法，包括如下步骤：将甘精胰岛素前体溶解于pH8～11的缓冲液中，控制反应体系的温度为0～37℃，按胰蛋白酶与甘精胰岛素前体的质量比为1：1000～10000加入胰蛋白酶本发明涉及的酶切转化方法能使产生的甘精胰岛素量显著增加，同时显著减少副产物，酶切收率高，所得的酶切液后续纯化容易，适合于工业生产上的应用。
胰岛素转化方法

[发明专利]一种用MspI检测人胃癌易感基因IL-1RN多态性rs9005的方法-CN201610095044.6在审
发明人：王凯娟;宋春花;侯瑞生;薛云红;高三友;杨文杰;陈晓霖;徐娅娟;范琦琪 -专利权人：郑州大学
申请日： 2016-02-22 - 公布日： 2016-05-11 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种用MspI检测人胃癌易感基因IL-1RN多态性rs9005的方法，采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法，是采用聚合酶链式反应扩增目的DNA片段，然后将待检测的DNA片段用限制性内切酶酶切，限制性内切酶识别并切割特异的序列，然后将酶切后的产物进行电泳，再由限制酶图谱分析此段序列的特异切位点，藉由片段的多样性来比对不同来源基因序列的差异性。简而言之，就是先PCR扩增相应目的片断，而后进行限制性内切酶切反应，电泳后观察比较限制性图谱来分析序列之间的差异。该方法重复性好，操作较简单，成本低，酶切结果容易辨识。
一种 mspi 检测胃癌基因 il rn 多态性 rs9005 方法

[发明专利]一种限制性内切酶SmaI及其表达纯化方法-CN201910804223.6在审
发明人：程槐旭;胡梦竹;燕东平;聂尚海 -专利权人：莫纳（武汉）生物科技有限公司
申请日： 2019-08-28 - 公布日： 2019-10-29 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了一种限制性内切酶SmaI的表达纯化方法，所述方法包括以下步骤：构建含有限制性内切酶SmaI表达片段的重组工程菌，诱导培养，裂解菌体，纯化回收产物，即得限制性内切酶SmaI；所述纯化的方式包括通过多种纯化方式的组合，得到纯度大于98％的限制性内切酶SmaI。
限制性内切酶阴离子交换层析肝素亲和层析重组工程菌回收产物离子亲和诱导培养层析构建菌体裂解

[发明专利]一种高效筛选单酶切基因表达载体的方法-CN200710043036.8无效
发明人：王海嵘;陈芳源 -专利权人：上海交通大学医学院附属仁济医院
申请日： 2007-06-28 - 公布日： 2008-12-31 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：一种高效筛选单酶切基因表达载体的方法，包括一个选择合适载体和限制性内切酶的过程，一个利用限制性内切酶对载体进行酶切的过程，一个选择插入基因片段的过程，一个利用限制性内切酶对基因片段进行单酶切的过程，将单酶切后的载体和单酶切后的基因片段转化感受态细胞，根据理论上连接正确的重组质粒的基因序列为模板，以插入基因片段的载体上的序列设计上游引物，以插入基因片段序列设计下游引物，进行菌落PCR，然后进行电泳，在菌落PCR产物电泳后出现的条带为正确构建的重组载体的菌落本发明采用单酶切方法构建载体，转化细菌后使用特定设计的引物，进行PCR，根据菌落PCR的结果，直接筛选出正确构建的重组载体，减少了测序费用。
一种高效筛选单酶切基因表达载体方法

[发明专利]一种猪FTO基因编码区A227G单碱基突变的检测方法及应用-CN201410513630.9有效
发明人：付言峰;李兰;任守文;方晓敏;李碧侠;王学敏;周艳红 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2014-09-29 - 公布日： 2015-01-14 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：根据GenBank数据库猪FTO基因序列设计特异性引物，对待检测猪基因组进行PCR扩增；分离、纯化扩增产物，获得特异核酸；使用限制性内切酶HhaI，对PCR扩增产物进行RFLP（酶切）分析，根据酶切后PCR产物的琼脂糖电泳条带，判断待检猪是否存在A227G单核苷酸碱基突变。
种猪 fto 基因编码 a227g 碱基突变检测方法应用

[发明专利]一种RNA片段及其制备方法和用途-CN201310263324.X有效
发明人：彭长庚;温婷 -专利权人：昆山彭济凯丰生物科技有限公司
申请日： 2013-06-27 - 公布日： 2017-05-03 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：（2）将所述化学合成的双链DNA片段克隆至载体中以得到多个克隆的扩增质粒，并分别对多个克隆的扩增质粒进行DNA测序；挑选能够完全正确编码目的RNA片段的扩增质粒的克隆作为模板质粒；（3）对模板质粒进行酶切，得到酶切产物，并从酶切产物中分离能够完全正确编码目的RNA片段的转录模板片段；（4）对所述转录模板片段进行体外转录，得到转录产物。
一种 rna 片段及其制备方法用途

[发明专利]GLP-1或其变体的羟基化检测方法-CN202111554562.7在审
发明人：阮路;景涛;李瑶;陆艳 -专利权人：佛山汉腾生物科技有限公司;广州汉腾生物科技有限公司;佛山普津生物技术有限公司
申请日： 2021-12-17 - 公布日： 2022-04-26 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种GLP‑1或其变体的羟基化检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将目标分析物GLP‑1或其变体与蛋白酶在溶剂中混合，进行酶切反应，得到SEQ ID NO:1所示序列的多肽，所述蛋白酶选自Trypsin酶和Lys‑C酶中的任意一种或两种；对酶切反应的产物进行液相色谱或液‑质谱联用分析。
glp 变体羟基检测方法

[发明专利]一种基于nMALDI-TOF技术的多SNP位点基因分型方法-CN202111543725.1在审
发明人：李赟;刘文兰 -专利权人：深圳市第二人民医院（深圳市转化医学研究院）
申请日： 2021-12-16 - 公布日： 2022-05-24 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：包括：针对待测样本DNA的多个SNP设计并合成探针以及PCR扩增引物；将探针和样本DNA进行杂交；杂交反应产物中加入延伸连接反应液，混匀，进行延伸、连接；延伸、连接反应产物中加入外切酶混合液，混匀，进行酶切；酶切反应产物中加入S5N7引物的混合液、纯化水、PCR预混液，混匀，进行PCR反应；PCR反应产物脱盐后，上样至MALDI‑TOF‑MS检测，得到检测结果。
一种基于 nmaldi tof 技术 snp 基因方法

[发明专利]一种用于检测男性个体痤疮易感人群的试剂盒-CN200610010717.X无效
发明人：肖春杰;何黎;陈穗云 -专利权人：云南大学
申请日： 2006-03-02 - 公布日： 2006-10-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明由标准样本、PCR扩增试剂、PCR产物酶切试剂及分子量标准品组成.其中：扩增引物片段为CYP17基因第一外显子翻译起始区上游－322至+92处，PCR产物长度为414bp，正向引物为CYP17－A阴性对照为CYP17基因T(－34)C位点TT和CT基因型的扩增片段的MspA1I内切酶消化产物，即－34TT型的酶切结果为414bp片段；－34TC酶切结果为414bp、289bp、125bp三种片段阳性对照为CYP17基因T(－34)C位点CC基因型的扩增片段的MspA1I内切酶消化产物，即－34CC酶切结果为289bp、125bp两种片段。本发明具有广泛的应用领域。
一种用于检测男性个体痤疮感人试剂盒

[发明专利]一种利用IIB型限制性内切酶进行微生物群落鉴定的方法-CN201811467986.8有效
发明人：孙政;王师;黄适;包振民;王修评;吕佳;朱鹏飞;滕飞 -专利权人：青岛欧易生物科技有限公司;中国海洋大学;中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2018-12-03 - 公布日： 2021-05-04 - 主分类号： G16B20/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用IIB型限制性内切酶进行微生物群落鉴定的方法，步骤如下：利用IIB型限制性内切酶对基因组DNA进行酶切；DNA酶切片段连接相应数目种类的接头，然后进行PCR扩增，扩增产物通过再次酶切扩增得到相应数目的DNA文库，将质检合格的DNA文库进行高通量测序；建立“微生物IIB酶切组”数据库，并找到针对物种在不同分类级上的特有序列，建立“微生物IIB酶切特有序列数据库”；对测序获得的序列数据进行质量控制，保留含有酶切特异性位点的
一种利用 iib 限制性内切酶进行微生物群落鉴定方法

[发明专利]一种转录组建库的方法、试剂和应用-CN201811475952.3在审
发明人：唐冲;陈智超;郭梅;石卓兴;杨林峰;高强 -专利权人：深圳华大基因科技服务有限公司
申请日： 2018-12-04 - 公布日： 2020-06-12 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本申请的转录组建库方法包括，采用带U碱基的引物对cDNA进行PCR扩增，然后对扩增产物进行酶切将U碱基消化去除，制备具有黏性末端的PCR扩增产物，利用所制备的黏性末端，与含有互补黏性末端的接头互补连接，本申请的转录组建库方法，在cDNA的PCR扩增引物中引入U碱基，通过一组酶先进行U碱基酶切，产生黏性末端，再利用酶切得到的黏性末端与接头连接，此过程在一管中一步完成；减少了Pacbio全长转录组建库步骤和操作环节
一种转录组建方法试剂应用

[发明专利]一种利用T4噬菌体DNA拓扑异构酶I连接DNA片段的方法-CN201610596497.7在审
发明人：张存清;李成栋 -专利权人：上海毕傲图生物科技有限公司
申请日： 2016-07-27 - 公布日： 2016-12-07 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用T4噬菌体DNA拓扑异构酶I连接DNA片段的方法，步骤一，设计引物：对至少两个待连接的DNA片段分别设计引物；步骤二，片段扩增：将相应的待连接DNA片段为模板，以各自的引物进行PCR扩增，得到扩增产物，然后对扩增产物进行纯化；步骤三，片段连接。本发明提供的DNA片段连接方法利用了T4噬菌体DNA拓扑异构酶I同时实现酶切与连接的功能，传统的方法需要先利用限制性内切酶使DNA片段产生相匹配的末端，纯化后利用T4连接酶连接片段，因此具有更快捷高效的特点，本发明的方法中待连接片段内部的序列不会对连接产生影响，消除了传统方法中酶切步骤的缺陷。
一种利用 t4 噬菌体 dna 拓扑异构酶连接片段方法

[发明专利]一种快速简便的基因克隆方法-CN201110009139.9无效
发明人：龙加福;周浩 -专利权人：南开大学
申请日： 2011-01-17 - 公布日： 2011-09-07 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：一种快速简便的基因克隆方法，包括目的DNA片段和目的载体的快速酶切，简便的抽提沉淀方法回收DNA，快速的连接酶连接得到环形DNA分子，然后将连接产物转化细菌后培养，菌落PCR筛选得到正确的基因克隆。本发明的特点在于发明了一种简便快速的抽提沉淀方法来回收酶切好的目的DNA和载体DNA，加上使用Fermentas公司的快速限制性内切酶系统和全式金公司的快速连接酶系统，使整个基因克隆关键步骤的时间缩短了本发明提供的克隆方法，适用于各种自备载体、插入片断和酶切位点；适用于各种PCR酶（常规Taq酶及各种高保真酶）的扩增产物；操作简单；精确定向克隆；重组效率高；重复性好；可靠性高。
一种快速简便基因克隆方法

[发明专利]突变青霉素G酰化酶、其重组表达质粒及转化的工程菌株-CN200610118042.0有效
发明人：黄鹤;张磐;王金刚;袁中一;杨晟;姜卫红 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2006-11-08 - 公布日： 2008-05-14 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明通过基因定点突变的方法获得的青霉素G酰化酶合成性能提高的基因、突变质粒、工程菌，并可在将工程菌发酵纯化后，获得青霉素G酰化酶合成性能提高的突变酶。本发明先用Kpn I和Pst I双酶切pUC18，然后用T4 polymerase补平，自连得到pZ01；用EcoR I酶切pZ01，再和同样用EcoR I酶切的pEES102连接，获得重组质粒pY020；再以pY020为模板质粒，利用TaKaRa MuTanBEST Kit对B.megaterium PGA进行定点突变，从而获得青霉素G酰化酶合成性能提高的突变质粒。将该工程菌放大发酵，纯化后可获得合成产物/水解产物的比值及7－ADCA最大转化率提高的突变酶。
突变青霉素酰化酶重组表达质粒转化工程菌株