本发明提供了一种对逆转录酶抑制剂耐药的HIV‑1毒株,基因组中编码逆转录酶是蛋白质序列为SEQ ID NO4所示的蛋白质;基因组中编码逆转录酶的基因是DNA序列为SEQ ID NO3所示的DNA分子。本发明将野生型HIV病毒的基因组中编码逆转录酶自N末端第181位氨基酸残基的密码子由酪氨酸的密码子突变为半胱氨酸的密码子、第188位氨基酸残基的密码子由酪氨酸的密码子突变为半胱氨酸的密码子得到的重组病毒本发明构建的毒株对奈拉伟平具有良好的耐药性,该毒株对奈拉伟平的半数抑制浓度(IC50)>0.06127μM,具有传代稳定性,可应用于抗艾滋病药物的筛选,对于抗HIV药物的筛选具有重大价值。