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[发明专利]硫酸软骨素ABC复合酶及应用-CN201911227594.9有效
发明人：李晔;周朝;袁其朋;王瑞丽;兰蓉;金丽华;范海涛 -专利权人：北京电子科技职业学院
申请日： 2019-12-04 - 公布日： 2021-07-06 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明提供一种硫酸软骨素ABC复合酶，包括硫酸软骨素酶ABC I和硫酸软骨素酶ABC II。所述硫酸软骨素酶ABC I和所述硫酸软骨素酶ABC II的酶活力比为(1～10):(1～10)。所述硫酸软骨素ABC复合酶为固定化酶。本发明还提供一种硫酸软骨素ABC复合酶的应用，利用该复合酶裂解硫酸软骨素。本发明提供的上述硫酸软骨素ABC复合酶具有协同增效作用，既突破了硫酸软骨素ABC I更偏向于大分子的结合的限制，又突破了硫酸软骨素ABC II对裂解速度的限制；因此，利用本发明提供的上述硫酸软骨素ABC复合酶可以有效提高裂解底物硫酸软骨素的效率及活性。
硫酸软骨素 abc 复合应用

[发明专利]硫酸软骨素ABC酶融合蛋白制备方法及其应用-CN201510711749.1有效
发明人：李晔;陈振娅;辛秀兰;陈亮;苏东海;章宇宁 -专利权人：北京电子科技职业学院
申请日： 2015-10-28 - 公布日： 2018-10-19 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种表达硫酸软骨素ABC酶融合蛋白的方法，该方法包括：1)分别克隆硫酸软骨素ABC酶基因和3‑磷酸甘油醛脱氢酶蛋白基因，并连接上述基因，使得后续表达的3‑磷酸甘油醛脱氢酶蛋白和硫酸软骨素ABC酶蛋白N端连接；2)将连接的硫酸软骨素ABC酶融合蛋白基因重组到表达载体；3)将含有硫酸软骨素ABC酶融合蛋白基因的表达载体转化到宿主细胞中，进行表达；以及4)收获并纯化表达的硫酸软骨素ABC酶融合蛋白使用该方法得到的活性硫酸软骨素ABC酶融合蛋白占总表达蛋白量的70％，使得后序纯化过程大大简化。得到的ChSase ABC I融合蛋白具有高酶活，能够用于生产硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。
硫酸软骨素 abc 融合蛋白制备方法及其应用

[发明专利]一种外切型硫酸软骨素酶ABC及其制备方法与应用-CN201810792833.4在审
发明人：李晔;周朝;兰蓉;辛秀兰;袁其朋 -专利权人：北京电子科技职业学院
申请日： 2018-07-18 - 公布日： 2018-11-13 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明提供一种外切型硫酸软骨素酶ABC，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供一种外切型硫酸软骨素酶ABC融合蛋白，该融合蛋白融合有上述外切型硫酸软骨素酶ABC和纯化标签。同时，本发明还提供一种含有上述外切型硫酸软骨素酶ABC的重组载体和转化体。本发明提供的外切型硫酸软骨素酶ABC的DNA序列对大肠杆菌的偏好性达0.97，从而提高了硫酸软骨素酶ABC的DNA序列在大肠杆菌中的表达效率，进而直接降低了外切型硫酸软骨素酶ABC的生产成本。另外，本发明还提供一种上述外切型硫酸软骨素酶ABC的制备方法和应用。
硫酸软骨素酶外切大肠杆菌融合蛋白制备方法和应用表达效率纯化标签重组载体偏好性转化体制备生产成本融合应用

[发明专利]用于纯化硫酸软骨素酶ABC的方法-CN201710271643.3有效
发明人：黄炳镠;钟玮康 -专利权人：爱华生物科技有限公司
申请日： 2017-04-24 - 公布日： 2021-08-31 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了用于纯化硫酸软骨素酶ABC的方法。该方法包括使用固定有肝素的亲和柱，通过层析法从所述含有硫酸软骨素酶ABC的基质中获得纯化的所述硫酸软骨素酶ABC。该方法能够获得高纯度的硫酸软骨素酶ABC，并且具有简单和高回收率的优点。
用于纯化硫酸软骨素 abc 方法

[发明专利]硫酸软骨素ABC酶融合蛋白、其编码基因以及其制备方法和应用-CN201410222796.5在审
发明人：李晔;陈振娅;王晓杰 -专利权人：北京电子科技职业学院
申请日： 2014-05-23 - 公布日： 2014-08-20 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明提供了一种硫酸软骨素ABC酶融合蛋白、其编码基因以及其制备方法。此外本发明还涉及一种生产低分子量硫酸软骨素A，B或C的方法。本发明的硫酸软骨素ABC酶融合蛋白采用一步纯化的方法，纯化方法简单，并且得到高纯度的ChSase ABC。得到的ChSase ABC具有高酶活，能够用于生产硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。
硫酸软骨素 abc 融合蛋白编码基因及其制备方法应用

[发明专利]硫酸软骨素ABC酶蛋白的制备方法及其应用-CN201711120265.5有效
发明人：李晔;陈振娅;周朝;辛秀兰;袁其朋 -专利权人：北京电子科技职业学院
申请日： 2017-11-14 - 公布日： 2021-05-14 - 主分类号： C12N15/60 文献下载
摘要：本发明提供了一种ChSaseABC酶蛋白的制备方法，该方法包括：分别克隆所述硫酸软骨素ABC酶基因和分子伴侣蛋白GroES基因，然后连接上述两个蛋白基因到同一个表达载体，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的重组载体；将所述重组载体转化到宿主细胞中进行表达，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的转化体；以及培养所述转化体，并进行物理破碎处理，制得所述硫酸软骨素ABC酶蛋白。本发明还提供一种ChSase ABC酶蛋白及其应用。上述ChSase ABC酶蛋白具有高酶活，能够用于生产低分子量硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。
硫酸软骨素 abc 蛋白制备方法及其应用

[发明专利]一种硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白及应用-CN201510125696.5在审
发明人：李晔;陈振娅;陈亮;辛秀兰 -专利权人：北京电子科技职业学院
申请日： 2015-03-20 - 公布日： 2015-06-17 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明提供了一种突变的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白、其编码基因以及其制备方法。本发明的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白采用一步纯化的方法，纯化方法简单，并且得到高纯度、高活性的ChSase ABC突变体。得到的ChSase ABC具有高酶活，能够用于生产硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。
一种硫酸软骨素 abc 突变体融合蛋白应用

[发明专利]一种硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白及应用-CN201510125697.X有效
发明人：李晔;陈振娅;金丽华;兰蓉 -专利权人：北京电子科技职业学院
申请日： 2015-03-20 - 公布日： 2018-07-06 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白、其编码基因以及其制备方法。本发明的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白采用一步纯化的方法，纯化方法简单，并且得到高纯度、更高活性的ChSase ABC突变体。得到的ChSase ABC具有高酶活，能够用于生产硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。
硫酸软骨素酶突变体融合蛋白编码基因生成条件一步纯化高纯度高活性突变体高酶制备应用生产

[发明专利]一株产硫酸软骨素ABC裂解酶的重组酵母菌及其构建方法与应用-CN201811425963.0有效
发明人：吴凌天;郗栋南;赖淑涵;朱益波;刘欣雨;霍薪宇;刘学润 -专利权人：常熟理工学院
申请日： 2018-11-27 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一株产硫酸软骨素ABC裂解酶的重组酵母菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将来源于普通变形杆菌Proteus vulgaris ATCC33420的硫酸软骨素ABC裂解酶进行异源表达，选取pPIC9K载体，通过甲醇进行诱导，实现了硫酸软骨素ABC裂解酶在毕赤酵母GS115中的分泌表达，并通过设计的硫酸软骨素ABC裂解酶‑酶膜反应器实现了小分子硫酸软骨素的高效连续生产，并使硫酸软骨素ABC裂解酶得到了循环利用，大大降低了生产成本。本发明以食品级酵母菌作为宿主菌株，安全可靠，为工业化绿色生产小分子硫酸软骨素A、B和C提供了有效的参考与借鉴，同时节能减排，经济效益和社会效益显著。
一株产硫酸软骨素 abc 裂解重组酵母菌及其构建方法应用

[发明专利]一种持续分泌活性软骨素酶ABC的人干细胞的制备方法及其试剂盒与临床应用-CN201510405013.1在审
发明人：陈振洲;郭阳 -专利权人：陈镇洲
申请日： 2015-07-13 - 公布日： 2015-10-28 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供一种持续分泌活性软骨素酶ABC的人干细胞的制备方法，其中，所述方法包括构建无N端信号肽软骨素酶ABC基因并在基因3’端加上加入提高转录和翻译的基因片段，构建到病毒载体上，转染人干细胞制备成可持续分泌活性软骨素酶ABC的人干细胞，以促使人干细胞长期有效分泌骨素酶ABC，-20℃下长期下保存仍具有酶活性；本发明还提供了持续分泌活性软骨素酶ABC的人干细胞的临床应用，该人干细胞将从种子细胞与改善不利于神经再生的微环境两方面入手
一种持续分泌活性软骨素 abc 干细胞制备方法及其试剂盒临床应用

[发明专利]一种重组硫酸软骨素酶ABC-I蛋白及其制备方法与应用-CN202110591614.1在审
发明人：范小蔓;黄佳滢;张业旺 -专利权人：江苏大学
申请日： 2021-05-28 - 公布日： 2021-09-21 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，具体涉及一种重组硫酸软骨素酶ABC‑I蛋白及其制备方法与应用。本发明使用分子克隆技术通过提取硫酸软骨素酶ABC‑I基因设计引物，经PCR扩增后与表达载体连接，构建重组表达载体；将重组表达载体转化至大肠杆菌，构建重组表达转化体，实现重组硫酸软骨素酶ABC‑I蛋白的可溶性表达所构建的重组硫酸软骨素酶ABC‑I蛋白表达量高、具有较高的酶活性，粗酶活性可达到7144U/L，经Ni‑NTA纯化后，酶活力为492.1 U/mg；且稳定性好，37℃下的半衰期为120 min，在4℃下的半衰期为在生产低分子量硫酸软骨素中具有较高的应用价值，在医药、环保等领域上前景广阔。
一种重组硫酸软骨素 abc 蛋白及其制备方法应用

[发明专利]一步法高效制备小分子硫酸软骨素和小分子透明质酸的方法-CN201811427090.7有效
发明人：吴凌天;卢成慧;高华;朱益波;杨福林;熊欢;黄晖荣;卢艳 -专利权人：常熟理工学院
申请日： 2018-11-27 - 公布日： 2021-10-19 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种一步法高效制备小分子硫酸软骨素和小分子透明质酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明将来源于普通变形杆菌Proteus vulgaris ATCC33420的硫酸软骨素ABC裂解酶进行异源表达，选取信号肽wapA，采用组成型木糖启动子Pxyl和pHY300PLK载体，通过木糖进行诱导，实现了硫酸软骨素ABC裂解酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达，并通过设计的硫酸软骨素裂解酶‑酶膜反应器实现了小分子硫酸软骨素和小分子透明质酸的高效连续生产。本发明以食品级枯草芽孢杆菌作为宿主菌株，安全可靠，为工业化绿色生产小分子硫酸软骨素和小分子透明质酸的提供了有效的参考与借鉴，同时节能减排，经济效益和社会效益显著。
一步法高效制备分子硫酸软骨素透明方法

[发明专利]一种化学发光法检测硫酸软骨素的分析方法-CN201810731829.7有效
发明人：周广连 -专利权人：齐鲁工业大学
申请日： 2018-07-05 - 公布日： 2020-10-09 - 主分类号： G01N21/76 文献下载
摘要：本发明公开了一种化学发光法检测硫酸软骨素的分析方法，待测硫酸软骨素样品经硫酸软骨素ABC酶处理后，其酶解产物能够催化过氧化氢氧化鲁米诺，从而显现蓝色荧光，通过检测荧光强度可以灵敏的检测待测硫酸软骨素的含量本发明检测方法检测下限为5ng/mL，具有良好检测精度，且操作简便，可应用于食品及药品中硫酸软骨素的含量检测。
一种化学发光检测硫酸软骨素分析方法

[发明专利]一种硫酸软骨素裂解酶及其编码基因与应用-CN202011114027.5有效
发明人：李福川;张庆冬;路丹荣;魏琳 -专利权人：山东大学
申请日： 2020-10-18 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明涉及一种硫酸软骨素裂解酶及其编码基因与应用。本发明中的硫酸软骨素裂解酶enCSase，分离自发光杆菌(Photobacterium sp.)QA16，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明中的硫酸软骨素裂解酶enCSase是一种新型CSase ABC酶，对硫酸软骨素、硫酸皮肤素和透明质酸均有较高的酶活性，降解硫酸软骨素、硫酸皮肤素和透明质酸时为内切酶模式；可应用于硫酸软骨素寡糖、硫酸皮肤素寡糖和透明质酸寡糖的制备
一种硫酸软骨素裂解及其编码基因应用

[发明专利]一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其分泌表达的方法-CN201910588540.9有效
发明人：康振;张琳;堵国成;陈坚;王浩 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-07-02 - 公布日： 2022-08-09 - 主分类号： C12N15/60 文献下载
摘要：本发明公开了一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其分泌表达的方法，属于生物工程技术领域。本发明将普通变形杆菌来源的硫酸软骨素ABC裂解酶进行了定点突变，通过融合信号肽加强了其分泌表达，对表达酶的菌株进行了外膜蛋白敲除，并进一步提供了菌株的培养策略。
一种硫酸软骨素 abc 裂解突变体及其分泌表达方法

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